[发明专利]一种蛋白质相互作用的检测方法有效
| 申请号： | 200910302657.2 | 申请日： | 2009-05-27 |
| 公开（公告）号： | CN101620233A | 公开（公告）日： | 2010-01-06 |
| 发明（设计）人： | 骆清铭;张智红;储军;秦岭松 | 申请（专利权）人： | 华中科技大学 |
| 主分类号： | G01N33/68 | 分类号： | G01N33/68;G01N21/64;G01N21/84 |
| 代理公司： | 北京市德权律师事务所 | 代理人： | 周发军 |
| 地址： | 430074湖北*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种检测方法，属于生物分子领域。本发明利用双分子荧光互补技术，基于橙红荧光蛋白和远红荧光蛋白，可以用来检测蛋白质之间的相互作用。本发明可以应用于在活体成像检测蛋白质相互作用，同时本发明还可以同步并行检测多对蛋白质相互作用。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 蛋白质 相互作用 检测 方法 | ||
【主权项】：
1.一种蛋白质相互作用的检测方法，利用双分子荧光互补技术，其特征在于，基于橙红荧光蛋白，该检测方法包括以下步骤：1)将橙红荧光蛋白切割成两个蛋白序列片段，分别为TN和TC，构成红色双分子荧光互补探针；2)将两个蛋白序列片段分别构建到两个表达载体中，将待测的两个目标蛋白的DNA序列分别与TN和TC构建用于表达融合蛋白；3)利用双分子荧光互补现象，将融合蛋白序列载体共转染细胞，使用光源及光学组件，在荧光显微镜观察刺激前后是否存在红色荧光；如果两目标蛋白存在相互作用，则TN和TC足够靠近，从而自发重组为完整荧光蛋白，产生红色荧光信号；如果没有或者只有极其微弱红色荧光，证明目标蛋白之间无相互作用。
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