[发明专利]一种类肝素多糖的制备方法

摘要

本发明公开了一种类肝素多糖的制备方法，由甲壳素经磷酸处理、6位选择性氧化反应、脱乙酰反应、磺化反应和/或硫酸酯化反应后制得类肝素多糖，其硫酸基取代度为0.3～1.35，分子量为0.40×104～1.5×104。本发明重复性好，所制备的类肝素多糖结构与肝素较接近，且具有较高的抗凝血活性，有望替代肝素用作抗凝血药物。

主权项

一种类肝素多糖的制备方法，其特征在于包括以下步骤：(1)磷酸处理：将甲壳素与60wt％～90wt％的磷酸按质量比为1∶10～30的比例混合，室温下搅拌至甲壳素完全溶解，接着在搅拌条件下将该溶液加入到水中，水的质量为甲壳素质量的30～200倍，沉淀后离心分离，再用水洗涤沉淀至中性得到酸处理产物；(2)6位选择性氧化反应：将酸处理产物分散于水中，水的质量为甲壳素质量的20～50倍，冰浴条件下加入2，2，6，6-四甲基哌啶-1-氧自由基和NaBr固体，2，2，6，6-四甲基哌啶-1-氧自由基和NaBr固体的质量分别为甲壳素质量的0.5％～2％和10％～45％，搅拌至完全溶解后加入3wt％～10wt％的NaClO溶液，NaClO溶液的质量为甲壳素质量的8～30倍，反应过程中使溶液的pH值稳定在9.5～10.8，反应0.5～1小时，然后加入甲醇、乙醇、正丙醇或异丙醇，甲醇、乙醇、正丙醇或异丙醇的质量为NaClO溶液质量的0.05～0.3倍，调节体系pH值至中性，然后将溶液透析或超滤净化，再减压蒸馏浓缩，用甲醇、乙醇、丙酮或乙醚沉淀，将沉淀物真空干燥得到6位选择性氧化反应产物；(3)脱乙酰反应：将6位选择性氧化反应产物分散在NaOH的乙醇-水溶液中，该NaOH的乙醇-水溶液中NaOH的浓度为10wt％～35wt％，乙醇与水的体积比为4～8∶1，该NaOH的乙醇-水溶液的质量为甲壳素质量的10～30倍，然后在50～70℃搅拌反应0.5～2小时，反应结束后过滤，将产物用水溶解后再调节体系pH值至中性，透析或超滤净化，减压蒸馏浓缩，用甲醇、乙醇、丙酮或乙醚沉淀，真空干燥得到脱乙酰反应产物；(4)将脱乙酰反应产物经磺化反应或硫酸酯化反应得到类肝素多糖，所述磺化反应的具体方法为：将脱乙酰反应产物溶解于水中，水的质量为甲壳素质量的10～100倍，接着加入三甲胺-三氧化硫复合物和Na2CO3，三甲胺-三氧化硫复合物和Na2CO3的加入量分别为甲壳素糖残基物质的量的3～10倍和2.5～5.0倍，于40～65℃恒温搅拌反应8～16小时，然后将反应液经透析或超滤净化，减压蒸馏浓缩，用甲醇、乙醇、丙酮或乙醚沉淀，真空干燥得到类肝素多糖；所述硫酸酯化反应的方法为：将脱乙酰反应产物分散于DMF、DMSO或甲酰胺中，DMF、DMSO或甲酰胺的质量为甲壳素质量的10～50倍，在40～60℃搅拌0.5～2小时，然后加入三氧化硫吡啶复合物，三氧化硫吡啶复合物与脱乙酰反应产物糖残基的物质的量之比为1～4∶1，搅拌反应3～6小时，将反应液经冰水冷却，再用1wt％～10wt％的碱溶液中和，然后将反应液透析或超滤净化，减压蒸馏浓缩，用甲醇、乙醇、丙酮或乙醚沉淀，真空干燥得到类肝素多糖；