[发明专利]基于雀稗固氮菌的根际促生菌肥及其制备方法

摘要

本发明公开了一种根际促生菌肥，是由每500-700g吸附剂中加入130-170ml菌悬液制成，雀稗固氮菌活菌数0.5×108-2×108cfu/g。本发明产品，不含有无机化肥的成分，长期使用不会污染土壤，并可改良土壤。

主权项

雀稗固氮菌，其特征是，通过下述步骤获得：A.土样采集：样品采自临沂地区小麦根际沉积物，样品采集后装入灭菌的封口聚乙烯袋中，低温保存；B.培养基：(1)LB培养基：蛋白胨10g、酵母膏5g、NaCl 10g、Agar 20g，总体积1000ml，pH 7.0‑7.5；(2)NFM培养基：苹果酸5g、K2PHO40.5g、MgSO4·7H2O 0.2g、CaCl2·2H2O 0.02g、NaCl 0.1g、NaMoO4·2H2O 0.002g、KOH 4.5g、Bromothymol Blue 5ml、Biotine 10ug、Agar2％，总体积1000ml，pH7.0‑7.5；(3)CCM培养基：KH2PO40.2g、NaCl 0.1g、K2HPO40.8g、Na2FeEDTA28mg、钼酸钠25mg、酵母浸膏100mg、甘露醇5g、蔗糖5g、乳酸钠0.5ml、蒸馏水900ml；C.菌株筛选方法：取样品1g，在无菌条件下用0.85％生理盐水配成10‑4、10‑5、10‑6三个稀释度，各稀释度的悬浮液接种于盛有半固体NFM、CCM培养基的血清试管瓶中，28‑30℃培养48h后，注入1mlC2H2，再置于28‑30℃培养24h‑48h后，对有C2H4产生的样品以平板划线法将其分别再培养于LB、NFM、CCM平板培养基上，置于28‑30℃的培养箱中培养24‑48h，然后分别挑取不同的典型单个菌落，并接种于新准备的CCM、NFM血清小瓶中，测定其固氮活性，挑选出生长快、圈大的菌落再分离纯化后，转斜面4℃保藏。