[发明专利]基于雀稗固氮菌的根际促生菌肥及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于生物肥料领域，涉及一种菌肥，同时还涉及该菌肥的生产方法，尤其涉及一种对小麦类禾本科作物具有固氮、溶磷、促生作用的高效根际菌肥及其制备方法。

背景技术

植物根际促生菌(Plant Growth Promoting Rhizobacteria，简称PGPR)是指自由生活在土壤或定植于植物根表、根内或茎叶的一类可促进植物生长、防治病害、增加作物产量的有益微生物。通常指具有固氮、溶磷、产生植物激素、分泌抗生素和产生促进植物生长生理活性物质等能力或至少具有其中之一能力的细菌。其可增加植物的植物量，提高植物营养品质，诱导植物系统产生抗病性等诸多功效。PGPR是80年代发展起来的一种菌肥，它应用面积较广，主要用于禾本科、蔬菜类，它能产生生长素、抑制病原菌、固氮和分解磷化物，PGPR的作用不是单一的，接种大量优势有益细菌于作物根际，促生作用是综合的结果，它并不是普通微肥某一种效应而是一种综合效应。作用机理：分泌植物促生物质，有人从能促进难溶性磷转化的50个分离物中，发现43个产生植物生长激素，29个产生赤霉素，45个产生激动素类物质，在这些PGPR中还分泌多种维生素，细维生B1、B6、H、B12等，还有的能分泌氨基酸；促进出芽，调控土传病害。减轻土传病害、降低发生的次数。PGPR能产生铁载体，它能对Fe3+具有超强络合力，能产生大量铁载体的根际细菌在与不能产生铁载体或产量很小的有害微生物竞争铁素营养时将占优势，从而抑制有害微生物的生长繁殖，表现出生物防治作用。

目前，国内PGPR菌的研究及相关生态菌肥的生产报道不多。国外，特别是印度、巴基斯坦、巴西、美国、澳大利亚等国家做了广泛的研究，已有自己的PGPR生态菌肥产品，同时新的研究领域和新技术不断出现。因不同生境的植物根系、茎杆生存着特定的促生菌菌株，因此我们只能借鉴国外的成功经验，从我国特定气候，生境中分离出PGPR菌株，以生产出适合我国气候、生境的生物菌肥，同时要在理论方面作更是深入的研究。目前，国内豆科植物生物肥料较多，但禾本科及其他非豆科植物生物肥料空缺。世界范围内禾本科作物种植面积较大，具有重要的经济价值和生态功能。它们大多数都以氮、磷为主要的营养元素。大量研究结果表明，PGPR在小麦、玉米、水稻、甘蔗等禾本科植物根际得到分离，PGPR的研究范围和内容也在不断扩展和深入。PGPR特别是兼具固氮、溶磷、产生植物激素、分泌抗生素于一身的菌种，是宝贵的生物资源，它们的开发利用将在生物菌肥的研制和禾本科植物的研发中起到举足轻重的作用。故从市场需求及人们环保意识增强等方面考虑，生态菌肥的研究及其开发具有重要的现实意义和广阔的发展前景。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明目的是，提供一种具有固氮、溶磷、分泌促生植物激素作用的菌肥，该肥料适应性强、性能稳定，具有固氮、溶磷、促生长等多种功能。同时，本发明的目的还在于提供一种小麦禾本科作物用高效根际菌肥的制备方法。本发明通过如下技术措施实现：

菌株雀稗固氮菌的筛选：

1.土样采集

样品采自临沂地区小麦根际沉积物，样品采集后装入灭菌的封口聚乙烯袋中，低温保存。

2.培养基

(1)LB培养基：蛋白胨10g、酵母膏5g、NaCl 10g、Agar 20g，总体积1000ml(蒸馏水补足)，pH 7.0-7.5；

(2)NFM培养基：苹果酸5g、K₂PHO₄ 0.5g、MgSO₄·7H₂O 0.2g、CaCl₂·2H₂O 0.02g、NaCl 0.1g、NaMoO₄·2H₂O 0.002g、KOH 4.5g、Bromothymol Blue(BTB 0.5％)5ml、Biotine10ug、Agar 2％(固体培养基)，总体积1000ml(蒸馏水补足)，PH7.0-7.5；

(3)CCM培养基：KH₂PO₄ 0.2g、NaCl 0.1g、K₂HPO₄ 0.8g、Na₂FeEDTA28mg、钼酸钠25mg、酵母浸膏100mg、甘露醇5g、蔗糖5g、乳酸钠0.5ml、蒸馏水900ml。

3.菌株筛选方法