[发明专利]两段流加式高密度发酵合成聚羟基苯烷酸酯的方法

摘要

本发明公开一种两段流加式高密度发酵合成聚羟基苯烷酸酯的方法，方法如下：(1)第一阶段：在发酵培养基中加入含苯有机物，然后接入恶臭假单胞菌种子液进行发酵培养，控制发酵罐转速150～800转/分钟，发酵温度30±2℃，pH 7.0±0.3，当溶解氧浓度和pH值同时迅速上升时流加碳源；(2)第二阶段：当微生物细胞吸光密度达到30后，调节pH值，同时实施氮限制和氧限制，当溶解氧浓度和pH值同时迅速上升时，流加碳源，微生物就会将发酵液中的碳源通过代谢合成转化为聚羟基苯烷酸酯。本发明具有微生物代谢含苯有机物的速率较高，有机物碳源对细胞生长抑制作用小，从而使得最终得到的细胞浓度和产物浓度都较高的优点。

主权项

一种两段流加式高密度发酵合成聚羟基苯烷酸酯的方法，其特征在于：制备方法如下：(1)第一阶段：首先在发酵培养基中加入不大于0.3g/L的含苯有机物和5～20g/L的糖作为碳源，然后接入恶臭假单胞菌种子液于发酵培养基中并在发酵罐中进行发酵培养，控制发酵罐的搅拌转速为150～800转/分钟，以1vvm的流量将无菌空气连续通入发酵罐内，并保持溶解氧浓度高于20％，发酵温度为30±2℃，并利用氨水调节pH为7.0±0.3；随时监控发酵过程中碳源的消耗量、溶解氧浓度和pH值的变化，当溶解氧浓度和pH值同时迅速上升时流加碳源，以保证微生物生长代谢所需；(2)第二阶段：当微生物细胞吸光密度达到30后，利用不含氮的碱性溶液来调节pH值，并停止补加氨水和其它含氮物质，使发酵液中的氮含量逐渐降低至0.001mol/L，造成发酵液中氮源供给不足实现氮限制；同时，适当降低发酵罐的搅拌转速使发酵液中溶解氧浓度低于10％，使氧的供给速率小于细胞正常生长代谢所需值形成氧限制，从而同时实施氮限制和氧限制，并随时监控溶解氧浓度和pH值的变化，当二者的值同时迅速上升时，流加碳源，微生物就会将发酵液中的碳源通过微生物代谢合成转化为聚羟基苯烷酸酯。