[发明专利]一种抗中华鳖免疫球蛋白单克隆抗体及其应用

摘要

一种抗中华鳖免疫球蛋白单克隆抗体，按以下步骤制备：(1)中华鳖特异性抗原：采中华鳖血置于玻瓶，室温凝固，35～38℃放置1.5～3h，再3～6℃放置8～12h，离心沉淀，取上清，制层析柱，经硫酸铵水溶液粗提并透析浓缩后稀释，过滤后上样，洗脱，最先洗脱的蛋白IgM即中华鳖特异性抗原；(2)多克隆抗体：以所述抗原免疫动物，取血，分离出抗血清，纯化制得所述多克隆抗体；(3)杂交瘤细胞株：以骨髓瘤细胞与产生抗中华鳖血清蛋白IgM抗体的脾细胞融合得该杂交瘤细胞株；(4)一种抗中华鳖免疫球蛋白的单克隆抗体：以所述的杂交瘤细胞株产生该单克隆抗体。以所述单克隆抗体检测中华鳖免疫血清效价。本发明适用于甲鱼类病原学、免疫学研究。

主权项

一种抗中华鳖免疫球蛋白单克隆抗体，其特征是所述单克隆抗体是按以下步骤制备的抗体：(1)制备中华鳖特异性抗原：中华鳖颈部切断，采其血置于玻瓶，于室温下凝固，用无菌棒沿玻瓶内壁括拨将血块与瓶壁的粘连分离后，先于35～38℃放置1.5～3h，再于3～6℃放置8～12h，血清充分析出，离心沉淀，取其上清，制SephadexG‑200层析柱，中华鳖血清经硫酸铵水溶液粗提并透析浓缩后，用PBS(pH7.4)倍比稀释，经滤膜过滤后上样，用PBS洗脱，自动采样器收集洗脱液，并用紫外分光光度计跟踪测定洗脱液的蛋白浓度，最先洗脱的蛋白IgM即为中华鳖特异性抗原；该抗原蛋白H链分子量为63kD，L链分子量均为22kD；(2)制备多克隆抗体：以所述中华鳖特异性抗原免疫动物，取血，分离出抗血清，纯化制得所述多克隆抗体，并以所述中华鳖特异性抗原的包被抗原检测所述抗血清，证明为含抗所述中华鳖特异性抗原的多克隆抗体；(3)制备一种杂交瘤细胞株：以骨髓瘤细胞与产生抗中华鳖血清蛋白IgM抗体的脾细胞融合得该杂交瘤细胞株，所述的脾细胞取自以所述中华鳖血清蛋白IgM免疫的动物；(4)制备一种抗中华鳖免疫球蛋白的单克隆抗体：以所述的杂交瘤细胞株产生该单克隆抗体，该单克隆抗体对所述的中华鳖免疫球蛋白IgM具有特异性。