[发明专利]丛枝菌根真菌孢子的高密度纯种生产方法

摘要

丛枝菌根真菌孢子的高密度纯种生产方法，属于微生物培养技术领域。包括以下工艺步骤：1)培养毛根农杆菌质粒DNA转化的胡萝卜根组织；2)毛根农杆菌质粒DNA转化的胡萝卜根组织与丛枝菌根真菌一起培养在改进合成培养基；3)在上述培养基中取含有被丛枝菌根真菌侵染的根、菌丝和孢子的直径为培养物移种至专用培养盒中进行培养；4)收集孢子和菌丝体；5)保存丛枝菌根真菌孢子。本发明与现有技术相比较，优点在于：1培养基是无菌环境的，成本低廉，既满足寄主植物生长又适合AM真菌生长；2寄主植物生长营养要求低，可以在合成培养基上生长培养；3由该方法培养的孢子是无污染纯种培养物；4生产的孢子保存于液体中，可以保持90％活性以上。

主权项

1.丛枝菌根真菌孢子的高密度纯种生产方法，其特征在于包括以下工艺步骤：1)将毛根农杆菌质粒DNA转化的胡萝卜根的根组织培养在改进合成培养基中，在黑暗中，温度23-25℃条件下，培养5-7个星期；2)将上述培养的毛根农杆菌质粒DNA转化的胡萝卜根的根组织转接至新的改进合成培养基中，再在培养基中接种丛枝菌根真菌，丛枝菌根真菌接种孢子量为300-500个/mL，在黑暗中，温度23-25℃条件下，培养7-10个星期；3)在步骤2)的培养基中取含有被丛枝菌根真菌侵染的根、菌丝和孢子的直径为1.5-2.5cm的培养物移种至专用培养盒中含有改进合成培养基的一室，并把新鲜培养的毛根农杆菌质粒DNA转化的胡萝卜根的根组织移种至培养物旁，所述的专用培养盒为两室培养盒，两室之间设置350-450目的横隔网，专用培养盒另一室中含有丛枝菌根真菌RT培养基，将上述的培养物在黑暗中，温度23-25℃条件下，培养7-10个星期；4)取上述专用培养盒含有丛枝菌根真菌RT培养基一室中的孢子和菌丝体，溶解于8-11毫摩尔无菌柠檬酸钠溶液中，并调pH至5.5-6.5，充分搅拌，再倾倒于无菌的0.45um孔径的筛子，用无菌水洗涤至只剩孢子和菌丝体；5)取上述得到的孢子和菌丝体，用筛子收集孢子，清洗干净后，浸泡于含有链霉素100-300mg/L和庆大霉素50-200mg/L的20％的甘油无菌溶液中保存。