[发明专利]丛枝菌根真菌孢子的高密度纯种生产方法

权利要求书

1.丛枝菌根真菌孢子的高密度纯种生产方法，其特征在于包括以下工艺步 骤：

1)将毛根农杆菌质粒DNA转化的胡萝卜根的根组织培养在改进合成培养基 中，在黑暗中，温度23-25℃条件下，培养5-7个星期；

2)将上述培养的毛根农杆菌质粒DNA转化的胡萝卜根的根组织转接至新的 改进合成培养基中，再在培养基中接种丛枝菌根真菌，丛枝菌根真菌接种孢子 量为300-500个/mL，在黑暗中，温度23-25℃条件下，培养7-10个星期；

3)在步骤2)的培养基中取含有被丛枝菌根真菌侵染的根、菌丝和孢子的 直径为1.5-2.5cm的培养物移种至专用培养盒中含有改进合成培养基的一室， 并把新鲜培养的毛根农杆菌质粒DNA转化的胡萝卜根的根组织移种至培养物旁， 所述的专用培养盒为两室培养盒，两室之间设置350-450目的横隔网，专用培 养盒另一室中含有丛枝菌根真菌RT培养基，将上述的培养物在黑暗中，温度 23-25℃条件下，培养7-10个星期；

4)取上述专用培养盒含有丛枝菌根真菌RT培养基一室中的孢子和菌丝体， 溶解于8-11毫摩尔无菌柠檬酸钠溶液中，并调pH至5.5-6.5，充分搅拌，再倾 倒于无菌的0.45um孔径的筛子，用无菌水洗涤至只剩孢子和菌丝体；

5)取上述得到的孢子和菌丝体，用筛子收集孢子，清洗干净后，浸泡于含 有链霉素100-300mg/L和庆大霉素50-200mg/L的20％的甘油无菌溶液中保存；

上述的改进合成培养基含有：硫酸镁720-740mg/L、硝酸钾70-90mg/L、 氯化钾55-75mg/L、硝酸钙270-290mg/L、EDTA铁钠盐5-12mg/L、肌醇40-60 mg/L、硫酸锰0.01-0.08mg/L、硫酸铜0.01-0.03mg/L、硼酸0.3-0.6mg/L、 硫酸锌0.1-0.4mg/L、碘化钾0.01-0.03mg/L、钼酸钠0.01-0.03mg/L、氯化 钴0.01-0.04mg/L、维生素B0.1-0.3mg/L、咇哆醇0.1-0.3mg/L、烟酸0.2-0.8 mg/L、蔗糖7500-8500mg/L、葡萄糖4500-5500mg/L和植物胶3500-4500mg/L；

上述的丛枝菌根真菌RT培养基为在改进合成培养基中减少蔗糖和葡萄糖两 个组分，并加入培养基重量0.1-0.2％的酒石酸氨和培养基体积2-5％的根浸出液， 所述的根浸出液为培养毛根农杆菌质粒DNA转化的胡萝卜根组织得到的液体。

2.如权利要求1所述的丛枝菌根真菌孢子的高密度纯种生产方法，其特征 在于所述的改进合成培养基含有：硫酸镁725-735mg/L、硝酸钾75-85mg/L、 氯化钾60-70mg/L、硝酸钙275-285mg/L、EDTA铁钠盐7-9mg/L、肌醇45-55mg/L、 硫酸锰0.01-0.05mg/L、硫酸铜0.01-0.02mg/L、硼酸0.4-0.5mg/L、硫酸锌 0.2-0.3mg/L、碘化钾0.01-0.02mg/L、钼酸钠0.01-0.02mg/L、氯化钴0.02-0.03 mg/L、维生素B0.1-0.2mg/L、咇哆醇0.1-0.2mg/L、烟酸0.4-0.6mg/L、蔗糖 7800-8200mg/L、葡萄糖4800-5200mg/L和植物胶3700-4200mg/L。

3.如权利要求1所述的丛枝菌根真菌孢子的高密度纯种生产方法，其特征 在于步骤2)中丛枝菌根真菌为丛枝菌根真菌的球囊霉属，丛枝菌根真菌接种孢 子的量为350-450个/mL，培养温度为23.5-24.5℃条件下，培养8-9个星期。

4.如权利要求1所述的丛枝菌根真菌孢子的高密度纯种生产方法，其特征 在于步骤2)中丛枝菌根真菌为根内球囊霉。

5.如权利要求1所述的丛枝菌根真菌孢子的高密度纯种生产方法，其特征 在于步骤3)中专用培养盒中间设置的横隔网为370-400目，培养条件为：在黑 暗中，温度23.5-24.5℃条件下，培养8-9个星期。