[发明专利]甲型肝炎灭活疫苗体外相对效力测试方法

摘要

本发明提供一种甲型肝炎灭活疫苗体外相对效力测试方法。彻底取代了传统的小鼠体内相对效力测试方法，解决了使用动物所带来的影响因素多、重复性差、检定周期长达30余天的不利因素，只需约3.5小时即可完成测试，减少了疫苗库存量，间接延长了疫苗的有效期，降低了劳动强度，尤其在疫苗紧张时可多生产150-200万支疫苗，可创产值4500-6000万元。另外，本发明采用双平行线生物检定原理，提出的甲型肝炎灭活疫苗体外相对效力测试方法，使HAV病毒含量与相对应A值的对数之间表现出良好的线性回归，R²均在0.97以上；检测结果表现出较好的稳定性及重复性，因此，是一种方便、快捷、可靠的测试方法。

主权项

1、一种甲型肝炎灭活疫苗体外相对效力测试方法，其特征在于经过下列步骤：A、将待检的甲型肝炎灭活疫苗及参比的甲型肝炎灭活疫苗用常规PBS稀释液进行不同稀释度的稀释；B、将稀释后的待检甲型肝炎灭活疫苗及参比甲型肝炎灭活疫苗分别按不同的稀释度加入酶标板对应的孔中，每个稀释度的疫苗分别放2孔，放入量为50～150μl/孔，同时在酶标板的孔中加入对照用阳性抗原和阴性抗原，每个抗原各加入2孔，并留空白调零孔，放入湿盒中，于37℃保温1～2小时后，洗板3～5次；C、按50～150μl/孔的量，在B步骤的酶标板的各孔中，加入稀释度为1∶500～3000的长臂生物素标记HAV抗体使用液，放入湿盒中，于37℃保温0.5～1小时后，洗板3～5次；D、按50～150μl/孔的量，在C步骤的酶标板的各孔中，加入稀释度为1∶2000～10000的辣根过氧化物酶标记链霉亲和素使用液，放入湿盒中，于37℃保温0.5～1小时后，洗板3～5次；E、在D步骤的酶标板各孔中，分别加入TMB显色液A和B各50μl/孔，混匀，放入湿盒中，37℃保温10～15分钟；F、按50μl/孔的量，在E步骤的酶标板的各孔中加入终止液后置于酶标仪上，在450nm波长下，用空白孔调零后检测吸光度A值。