[发明专利]一种灯盏花素前体脂质体的质量控制方法

摘要

本发明提供一种灯盏花素前体脂质体的质量控制方法，由灯盏花素前体脂质体的制备、凝胶柱色谱或者离心分离其前体脂质体、高效液相色谱法检测其包封率各步骤组成，属药品技术领域。其前体脂质体含灯盏花素5-10份，大豆磷脂10-40份，维生素E 0.5-2份，甘露醇或乳糖20-80份；凝胶柱色谱分离需脂质体混悬液0.5ml，离心分离需脂质体混悬液5mL，离心30min，转速18000r/min；检测包封率以甲醇-乙腈-40mmol/L KH₂PO₄(20∶10∶70)为流动相；检测波长为335nm；理论板数按野黄芩苷计算不低于4000。该方法大大节约了成本和节省了检测时间，操作简便，检测准确度和精确度高。

主权项

1、一种灯盏花素前体脂质体的质量控制方法，由灯盏花素前体脂质体的制备、凝胶柱色谱分离灯盏花素前体脂质体或者离心分离灯盏花素前体脂质体、高效液相色谱法检测灯盏花素前体脂质体的包封率三个步骤组成，其特征在于，按以下步骤进行：(1)灯盏花素前体脂质体的制备按重量份数，精密称取灯盏花素5-10份，大豆磷脂10-40份，维生素E 0.5-2份，甘露醇或乳糖20-80份；将大豆磷脂、维生素E溶于无水乙醇50-2000mL中，将其注入至已配好的灯盏花素水溶液0.5-5L中，并用0.1mol/L的NaOH调PH6.8使其溶解，搅拌30min，同时减压至真空压为0.06kPa除去乙醇，之后加入甘露醇或乳糖搅拌溶解，即得灯盏花素脂质体混悬液；将此混悬液按喷干条件为：进口温度120℃，流速2.0ml·min-1，雾化压力180kPa进行喷干，即得干燥、流动性好的灯盏花素前体脂质体；(2)凝胶柱色谱分离灯盏花素前体脂质体或者离心分离灯盏花素前体脂质体采用凝胶柱色谱分离灯盏花素前体脂质体，即精密量取步骤1所制备的灯盏花素前体脂质体粉末加纯化水水化配制成10mg/ml的脂质体混悬液，精密量取此脂质体混悬液0.5ml滴加在交联葡聚糖G50凝胶柱上，然后用PH6.8的磷酸盐缓冲液以1ml/min的流速洗脱，连续收集80ml；将洗脱液在80℃的低温蒸干，加甲醇1ml使其溶解并转移至容量瓶中，用甲醇稀释100倍即得供试品溶液A1；另外精密量取上述脂质体混悬液0.5ml用甲醇稀释1000倍即得供试品溶液A2；所得供试品溶液A1和供试品溶液A2备用待检测；或者采用离心分离灯盏花素前体脂质体，即精密量取步骤1所制备的灯盏花素前体脂质体粉末加纯化水水化配制成10mg/ml的脂质体混悬液，精密量取此脂质体混悬液5mL，离心30min，转速18000r/min，共离心3次，每次间隔30min，取上清液，将沉淀脂质体用蒸馏水洗3次，每次4ml，其洗液与上清液合并，将合并后的上清液在80℃的低温蒸干，分别加甲醇1ml使其溶解并转移至容量瓶中用甲醇稀释100倍即得供试品溶液K1；另外精密量取上述脂质体混悬液0.5ml用甲醇稀释1000倍即得供试品溶液K2；所得供试品溶液K1和供试品溶液K2备用待检测；(3)高效液相色谱法检测灯盏花素前体脂质体的包封率①对照品溶液的配制，精密称取纯度为99％以上的野黄芩苷25mg，置25mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释制成含1000ug/ml的贮备液；精密吸取该贮备液0.5ml，置25ml容量瓶中，流动相为甲醇-乙腈-40mmol/L KH2PO4且其体积比为20∶10∶70，该流动相用磷酸调至PH2.5，加该流动相至刻度，摇匀，制成每1ml含20μg的溶液，即得；②色谱条件和系统适用性试验，色谱柱：Agilent ZORBAX SB-C184.6mm×250mm，5μm；以甲醇-乙腈-40mmol/L KH2PO4且其体积比是20∶10∶70为流动相；该流动相用磷酸调至PH2.5；；检测波长为335nm；流速1.0ml/min；柱温35℃；理论板数按野黄芩苷计算不低于4000；③测定法，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，测定，按外标法以峰面积计算，即得灯盏花素含量。