[发明专利]一种通过诱变提高芽孢杆菌对镉的耐受性的方法

摘要

本发明涉及微生物育种方法，具体说涉及建立一种基于基因组改组技术进行真核和原核微生物原生质体多亲本融合的方法。为实现本发明的目的采用的技术方案是：首先对微生物进行人工诱变，经筛选获得对镉具有高效抗镉性能的突变微生物；接下来以具有高效抗镉性能的突变微生物为出发菌株，采用细胞原生质体多亲本融合方法，经培养斜面孢子、菌株诱变、基因组改组、筛选、递推式多次融合，获得具有较好性状抗镉的菌株。采用本发明建立的细胞原生质体多亲本融合方法，对抗镉的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtillis)和热带假丝酵母菌(Candida tropicalis)进行改造，获得2株抗镉性能比Bacillus subtillis和Candida tropicalis大幅度提高的优良融合菌株。

主权项

一种通过诱变提高芽孢杆菌对镉的耐受性的方法，其特征依次包括以下步骤：(1)将枯草芽孢杆菌进行预培养，在牛肉膏蛋白胨培养基上，经200r/min振荡培养10h后，离心去除培养基，用生理盐水制备菌悬液。加入玻璃球振荡分散，以脱脂棉过滤，使形成单细胞，分散程度达90‑95％。(2)对步骤(1)中所制备的菌悬液3mL(106个/mL)置于直径7cm的平底培养皿中，进行紫外线诱变：用15W功率的紫外灯管和固定距离为30cm的条件下照射5min后，对诱变后的活菌落进行筛选，获得对镉具耐受性的突变芽孢杆菌。(3)对步骤(2)诱变后的突变菌株进行筛选的方法为浓度梯度平板初筛和摇瓶发酵复筛相结合的两步筛选法。