[发明专利]一种高效的脂肪酶基因定向进化方法

摘要

本发明提出了一种高效的脂肪酶基因定向进化方法，其步骤为1)酿酒酵母展示表达载体构建；2)脂肪酶酿酒酵母展示表达重组质粒构建；3)带载体同源序列的脂肪酶基因片段获得及表达突变文库的构建；4)展示表达突变文库及突变体分析。本发明将常规定向进化技术中突变文库的构建和突变体的表达实现同步，克服现有技术中脂肪酶分子定向进化操作步骤复杂、突变体筛选困难等缺点。

主权项

1、一种高效的脂肪酶基因定向进化方法，其特征在于步骤为：1)酿酒酵母展示表达载体构建：利用酵母细胞Flop膜蛋白或a-凝聚素、α-凝聚素、等膜蛋白构建适合脂肪酶表达的展示表达载体；2)脂肪酶酿酒酵母展示表达重组质粒构建：利用酿酒酵母展示表达载体，构建不同来源、具有一定同源性的脂肪酶基因在酿酒酵母中展示表达的重组载体；3)带载体同源序列的脂肪酶基因片段获得及表达突变文库的构建：根据展示表达载体序列设计引物，PCR扩增带有酿酒酵母展示表达载体同源序列的不同来源脂肪酶基因片段；将带有载体同源序列的脂肪酶基因片段与线性化的展示表达载体混合，转化酿酒酵母，得到表达突变文库；4)展示表达突变文库及突变体分析：不同来源的脂肪酶基因在酿酒酵母中实现同源重组，得到展示表达突变文库。