[发明专利]一种赤潮藻毒素软海绵酸OA的ELISA检测方法无效
| 申请号： | 200910055081.4 | 申请日： | 2009-07-21 |
| 公开（公告）号： | CN101598732A | 公开（公告）日： | 2009-12-09 |
| 发明（设计）人： | 何培民;柳俊秀;胡乐琴;王权;李春霞 | 申请（专利权）人： | 上海海洋大学 |
| 主分类号： | G01N33/577 | 分类号： | G01N33/577 |
| 代理公司： | 上海智力专利商标事务所 | 代理人： | 瞿承达;罗芳英 |
| 地址： | 201306上海市*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明提供一种赤潮藻毒素软海绵酸OA的ELISA检测方法，它不但能快速、简便、灵敏地测定样品中OA的含量，而且成本低廉。本发明提供的ELISA检测方法，包括以下步骤：(1)包被抗原用碳酸盐缓冲液将其稀释为1∶2000后，包被酶标板；(2)洗板3次后封酶标板；(3)弃去封闭液，洗板，将稀释为系列浓度的OA标准溶液和贝类萃取液，分别与等体积的按1∶10000稀释的抗OA的单克隆抗体振摇混匀反应；(4)弃去残液，洗板，加入HRP标记的羊抗小鼠IgG抗体，按1∶5000进行稀释，每孔100ul，37℃下保温1h；(5)弃去残液，洗板，加显色液，测各孔的OD450值。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 赤潮 毒素 海绵 oa elisa 检测 方法 | ||
【主权项】：
1.一种赤潮藻毒素软海绵酸OA的ELISA检测方法，其特征在于包括如下步骤：(1)包被抗原：用碳酸盐缓冲液将其稀释为1∶2000后，包被96孔酶标板，每孔100ul，4℃过夜；(2)弃去残液，用含0.05％Tween-20磷酸盐缓冲液PBST洗板3次，每孔200ul，后拍干，用1％明胶封闭酶标板，每孔150ul，37℃下保温2h；(3)弃去封闭液，洗板；将稀释为系列浓度的OA标准溶液、空白对照、未加OA的贝类萃取液和加入OA标准溶液的贝类萃取液，分别与等体积的按1∶10000稀释的抗OA的单克隆抗体振摇混匀，即单抗最终稀释度为1∶20000；每孔加入100ul，37℃下保温1h；(4)弃去残液，洗板，加入HRP标记的羊抗小鼠IgG抗体，按1∶5000进行稀释，每孔100ul，37℃下保温1h；(5)弃去残液，洗板，每孔加入100ul TMB显色液，室温下反应10min，用2M H2SO4终止反应，每孔50ul，酶标仪测定各微孔的OD450值。
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