[发明专利]一种无激素规模化培养生产铁皮石斛胚芽干品的方法

摘要

本发明涉及一种无激素规模化培养生产铁皮石斛胚芽干品的方法，包括：(1)外植体的培养和接种；(2)胚状体的继代增殖；(3)无激素一级液体培养及筛选；(4)无激素二级通气培养；(5)无激素终极20L通气培养；(6)鲜成品的后处理。该方法步骤简单，生产周期时间短，成本低，对环境友好，适合工业化生产，解决了铁皮石斛资源短缺的问题。

主权项

1.一种无激素规模化培养生产铁皮石斛胚芽干品的方法，包括：(1)外植体的培养和接种将铁皮石斛原种植株培养成3-5cm高，带3-5片叶，具3-4节间的成年株，采集外植体用自来水反复冲洗至无泡沫为止，然后将其灭菌，切去全叶和植物基部0.3～0.6cm，接种到M2固体培养基，于暗培养条件下，24℃±1℃，诱导休眠芽的生长35～45天；(2)胚状体的继代增殖将休眠芽诱导成功后，移到光培条件下2000Lx，16～20小时光照，长到0.8～1.2cm时剥离休眠芽，移入到M2液体培养基，每7天继代一次，24℃±1℃，自然室内光强度，经45-50天后，诱导出胚状体；(3)无激素一级培养及筛选取上述胚状体接种到M2液体培养基，进行一级液体扩大培养，每10天继代一次，每次继代按1∶2扩大群体，经3-5个周期后，挑选形态生长正常、绿色、外形大小相近的培养系，用M0液体培养基，每10天继代一次，进行5～8次的继代培养，得成熟细胞系；(4)无激素二级通气培养将上述成熟细胞系接种到M0液体培养基进行二级通气扩大培养，并加入一级培养后的条件培养基，每天提供14-16小时光照或采取太阳自然光，培养15～20天；(5)无激素终极通气培养选择培养容器，每个容器装液量为16升，其中14升为新鲜的M0液体培养基，2升为步骤(4)培养时的条件培养基，选择步骤(4)得到的种子进行接种，保持2000-2500Lx光强度，按38-40度斜面于专制培养架上培养15～20天，收集鲜品；(6)鲜成品的后处理将上述鲜品收集后，用纯净水冲洗一遍后漓干、称重，然后于50～60℃干燥，按250g、500g、1000g或5000g定量包装，经γ射线灭菌后，8℃-12℃保存。