[发明专利]一种分离病毒变异序列的方法及其分离的口蹄疫病毒变异序列

摘要

本发明公开一种分离病毒变异序列的方法及其分离的口蹄疫病毒变异序列，该方法通过先对已报道的病毒变异区域进行分析，并利用随机肽技术，分离得到能够模拟病毒变异的多条多肽，将这些多肽用于疫苗研发，可使得疫苗研制能兼顾病毒的变异，起到未雨绸缪的作用。本发明还得到口蹄疫病毒的变异序列，其氨基酸序列如SEQ ID NO：101～200所示，对应的核苷酸序列如SEQ ID NO：1～100所示。本发明的方法操作简单，且可高效地发现病毒新的变异序列，有力地保障了全国畜禽养殖业，为广谱疫苗的开发开辟新途径，也为开发禽流感疫苗、爱滋病疫苗等提供了新的技术方向。

主权项

1、一种分离病毒变异序列的方法，其特征在于该方法包括如下步骤：(1)分析对比数据库中该病毒的氨基酸序列，找出该病毒抗原决定簇位点的编码序列以及高可变区域的编码序列，设计混合多肽，并设计该混合多肽的随机引物；(2)将上述随机引物进行不对称PCR拼接；(3)将上述拼接产物与酵母分泌表达信号肽序列构建成融合基因；将该融合基因和大肠杆菌-酿酒酵母穿梭载体分别进行双酶切，大肠杆菌-酿酒酵母穿梭载体在双酶切位点间再多进行一次酶切，且酶切后用牛小肠碱性磷酸酶处理；将融合基因的双酶切产物和大肠杆菌-酿酒酵母穿梭载体的三酶切产物连接；(4)将上述连接产物电激转化大肠杆菌，得到质粒，酶切处理该质粒后，再次电激转化，转化产物经筛选后，挑取克隆进行测序，即分离得到病毒变异序列。