[发明专利]一种临床磁共振成像检测庆大霉素的方法

摘要

一种临床磁共振成像检测庆大霉素的方法，属于免疫检测技术领域。本发明将庆大霉素修饰磁性纳米粒子，庆大霉素标准或待测上清液，庆大霉素抗体，羊抗兔二抗，抗体与庆大霉素修饰磁性纳米粒子免疫聚合物的形成，由此产生磁共振信号，进行磁共振检测。磁共振信号检测是利用抗体与庆大霉素修饰磁性纳米粒子形成免疫聚合物，有效的缩短水中质子横向驰豫时间T₂值而产生信号。通常样品中庆大霉素浓度越大，被抗体捕获的庆大霉素量越多，则与磁性纳米粒子表面的庆大霉素结合的抗体越少，测得的T₂数值越大。本法不需复杂的样品前处理；操作简便，只需加待测样品孵育后直接测定T₂值，一步就可完成；用于标记超顺磁性纳米粒子的粒径约为10nm，水溶性高，分散性稳定性好。

主权项

1、一种临床磁共振成像检测庆大霉素的方法，其特征是首先将庆大霉素修饰磁性纳米粒子，加庆大霉素标准或待测上清液，庆大霉素抗体，羊抗兔二抗，抗体与庆大霉素修饰磁性纳米粒子形成免疫聚合物，由此产生磁共振信号，进行磁共振检测；步骤为：(1)庆大霉素与磁性纳米粒子的藕联：1μL碳二亚股EDC和2.4mg N-羟基硫代琥珀酰亚胺sulfo-NHS加入到0.5mL、1.3mg/mL的Fe3O4水溶液中，反应15min活化，活化后的Fe3O4加入1mg庆大霉素，室温反应4小时，于0.01M、pH 7.4的PBS中透析24小时，除去未反应的庆大霉素小分子，制得庆大霉素修饰的Fe3O4磁性纳米粒子；(2)磁共振检测，绘制驰豫时间T2～C庆大霉素浓度标准曲线：20μL、150μg/mL的庆大霉素修饰的Fe3O4磁性纳米粒子中加入20μL不同浓度的庆大霉素标准品，加入1μL、5mg/mL庆大霉素抗体，再加入1μL羊抗兔二抗，孵育2小时后，稀释到体积为250μL，加入到微孔板中，测磁共振，以横向驰豫时间T2绘制T2～C庆大霉素浓度标准曲线；对照组设置：庆大霉素抗体用地塞米松抗体代替，其它操作同上；所用的溶液皆为0.01M、pH7.4的PBS缓冲液；庆大霉素标准品浓度分别为0、8、12、16、32、48、72、100、120、144ng/mL；用德国西门子临床磁共振成像设备MAGNETOM Avanto 1.5T MRI测磁共振，扫描时间参数为：回波时间TE为20-120ms，共6个回波，脉冲重复间隔时间TR为2000ms，所用线圈为头线圈；(3)磁共振定量检测：20μL、150μg/mL的庆大霉素修饰的Fe3O4磁性纳米粒子中加入20μL的待测上清液，加入1μL、5mg/mL庆大霉素抗体，再加入1μL羊抗兔二抗，孵育2小时后，稀释到体积为250μL，加入到微孔板中，测磁共振，以横向驰豫时间T2与绘制的T2～C庆大霉素浓度标准曲线对照，求出样品中庆大霉素的浓度。