[发明专利]一种腺病毒载体介导的立体状态牙胚成釉细胞基因转染方法

摘要

本发明公开了一种腺病毒载体介导的立体状态牙胚成釉细胞基因转染方法，包括以下步骤：将分离到的初生牙胚牙尖向上置于Transwell内置小室的微孔滤膜上，在包含牙胚培养液下培养；使用含AAV-GFP基因的传染性病毒颗粒，感染培养的牙胚；感染24小时后在牙胚的表层出现绿色荧光，结合釉原蛋白的免疫染色，在牙胚定位GFP和釉原蛋白共表达的重组牙胚成釉细胞。在Transwell系统体外培养牙胚的成釉细胞保持着立体状态，成釉细胞与周围的基质和相关细胞存在互动，而这种模式下基因转染成釉细胞成功，有利于从三维的角度研究牙胚中成釉细胞的基因功能。

主权项

1、一种腺病毒载体介导的立体状态牙胚成釉细胞基因转染方法，其特征在于，包括以下步骤：1)将分离到的初生牙胚牙尖向上置于Transwell内置小室的微孔滤膜上，Transwell内置小室位于含有牙胚培养液的孔板内；所述牙胚培养液为：BGJb培养液，还包含体积分数为0.1％的胎牛血清、100IU/ml的青霉素、80μg/ml链霉素和5mg/L肝素；每孔中加入1ml牙胚培养液，在37℃、体积分数为5％的CO2孵育箱饱和湿度下培养；2)以包含GFP基因的腺病毒载体AAV-GFP感染人胚肾AAV-293细胞，产生具有传染性的病毒颗粒，将病毒颗粒与牙胚培养液混和制备成病毒浓度为500～5000MOI的感染液；3)将感染液加入培养有牙胚的Transwell内置小室，感染后48小时，移去感染液，牙胚继续用牙胚培养液培养，并每天更新牙胚培养液；4)当牙胚的表层出现绿色荧光时，结合釉原蛋白的免疫染色，在牙胚上定位GFP和釉原蛋白共表达的牙胚成釉细胞。