[发明专利]一种从毛蚶中分离纯化血红蛋白的方法

摘要

本发明涉及一种从毛蚶中分离纯化血红蛋白的方法，首先用注射器插入新鲜毛蚶鳃部取血，离心收集血细胞沉淀，然后用Hepes缓冲液悬浮后，在-80℃和4℃反复冻融破碎细胞，离心收集上清液，4℃离心浓缩至0.5毫升，上样于Superdex200凝胶过滤柱，0.5毫升/分洗脱，1毫升/管收集洗脱组分，检测并收集具有波长415nm高吸收值的洗脱组分，4℃离心浓缩至0.5毫升，继续上样于SephacrylS-100凝胶过滤柱，0.5毫升/分洗脱，1毫升/管收集洗脱组分，最后检测并收集具有波长415nm最高吸收值的洗脱组分，即为毛蚶血红蛋白纯化样品。本发明方法简便、重复性好且血红蛋白的得率高，所纯化血红蛋白仍保持有四级结构和天然活性，便于进行多重生物学功能研究。

主权项

1、一种从毛蚶中分离纯化血红蛋白的方法，首先将清洗后的新鲜毛蚶用注射器进行鳃部取血，离心收集血细胞沉淀并用pH7.2的50mM Hepes缓冲液悬浮血细胞，反复冻融以破碎血细胞，在4℃条件下8000-9000转/分离心收集上清液以分离出毛蚶血红蛋白，用Centricon-10浓缩离心管在4℃条件下3000～4000转/分离心，将该上清液浓缩至0.5毫升，即为毛蚶血红蛋白粗品，上样于Hepes缓冲液预平衡2小时的Superdex200凝胶过滤柱进行第一步柱层析纯化，在4℃条件下洗脱并收集各洗脱组分，分别检测各洗脱组分在波长415nm的光吸收值，收集其中的具有最高光吸收峰值的洗脱组分，经Centricon-10浓缩离心管在4℃条件下浓缩至0.5毫升，再上样于Hepes缓冲液预平衡2小时的Sephacryl S-100凝胶过滤柱进行第二步柱层析纯化，在4℃条件下洗脱并收集各洗脱组分，分别检测各洗脱组分在波长415nm的光吸收值，收集其中的具有最高光吸收峰值的洗脱组分，即为毛蚶血红蛋白纯化样品。