[发明专利]一种分离芫花条化学成分的方法

摘要

本发明提供一种分离芫花条化学成分的方法，其用硅胶柱色谱法对瑞香科植物芫花枝条的乙醇提取物经石油醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁醇深度萃取，进行化学成分的分离。室温萃取，节约能源并可避免萃取过程中有效成分的破坏；分离得比较彻底，共获得15种化合物；采用理化及波谱分析方法，分别鉴定为：(1)十八碳酸单甘油酯、(2)邻苯二甲酸二丁酯、(3)棕榈酸、(4)β-谷甾醇、(5)咖啡酸十八烷酯、(6)咖啡酸正二十烷酯、(7)山奈酚、(8)西瑞香素、(9)芹菜素、(10)紫丁香树脂醇、(11)木犀草素、(12)β-胡萝卜苷、(13)刺五加苷B、(14)松脂醇二葡萄糖苷、(15)二氢刺五加苷B。其中，化合物(1)、(2)、(3)、(6)、(10)、(13)、(14)和(15)为首次分离得到。

主权项

1.一种分离芫花条化学成分的方法，其特征是用硅胶柱色谱法对瑞香科植物芫花Daphne genkwa Sieb.et Zucc.枝条的乙醇提取物经石油醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁醇深度萃取，进行化学成分的分离，该方法分作如下步骤：(1)制备芫花枝条乙醇提取物重量比例：芫花枝条∶乙醇＝1∶1～2干燥芫花枝条，常规净制、切段；乙醇含量为95±5％；室温下渗漉法提取3～4次，合并渗漉液，50～55℃浓缩至稠膏状得浸膏；(2)制备乙醇提取物的溶剂萃取物将上述芫花枝条浸膏均匀混悬于水中，芫花枝条浸膏混悬液，先后分别用石油醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁醇萃取；①石油醚萃取配量：固液比为芫花枝条浸膏重量∶石油醚体积＝1∶10～14每次萃取时，混悬液加配量的石油醚，室温下搅拌3h，分离萃取石油醚层；反复萃取3次，合并石油醚萃取液；备用；石油醚萃取液进行硅胶柱层析∶硅胶柱高120cm，柱径10cm，柱温室温；环己烷-乙酸乙酯梯度洗脱，梯度范围，环己烷-乙酸乙酯100％∶0％→50％∶50％，得到I～XV共15个部分；a.将第III部分过小硅胶柱，小硅胶柱200～300目，柱径2.5cm，柱高45cm，柱温室温，环己烷-乙酸乙酯梯度洗脱，梯度范围，环己烷-乙酸乙酯100％∶0％→50％∶50％，得到化合物1，3和4；b.将第V部分过小硅胶柱，小硅胶柱200～300目，硅胶柱高45cm，柱径2.5cm，柱温室温，环己烷-乙酸乙酯梯度洗脱，梯度范围，环己烷-乙酸乙酯100％∶0％→50％∶50％；环己烷∶乙酸乙酯＝80％∶20％时，得到无色油状液体为化合物2；环己烷∶乙酸乙酯＝75％∶25％时，根据极性的不同，依次得白色粉末为化合物5和6；②乙酸乙酯萃取配量：固液比为芫花枝条浸膏重量∶乙酸乙酯体积＝1∶6～10每次萃取时，混悬液加配量的乙酸乙酯，室温下搅拌3h，分离萃取乙酸乙酯层，反复萃取3次，合并乙酸乙酯萃取液；备用；乙酸乙酯萃取液进行硅胶柱层析：硅胶柱高120cm，柱径10cm，柱温室温；氯仿-甲醇梯度洗脱，梯度范围，氯仿-甲醇100％∶0％→85％∶15％；氯仿∶甲醇＝100％∶85％时得到I～XX共20个部分；a.将第II部分过小硅胶柱，小硅胶柱200～300目，柱径2.5cm，柱高45cm，柱温室温，以环己烷-丙酮梯度洗脱，梯度范围，环己烷-丙酮100％∶0％→60％∶40％；环己烷∶丙酮＝60％∶40％时，所得洗脱液经进一步Sephadex LH-20凝胶柱色谱进行纯化，经丙酮重结晶得化合物7；b.将第IV部分过小硅胶柱，硅胶柱200-300目，柱径2.5cm，柱高45cm，柱温室温，以氯仿-甲醇梯度洗脱，梯度范围，氯仿-甲醇100％∶0％→85％∶15％；氯仿∶甲醇＝90％∶10％时，洗脱部分析出晶体，经重结晶得化合物8；氯仿∶甲醇＝80％∶20％时，洗脱液进一步进行Sephadex LH-20凝胶柱色谱进行纯化，经丙酮重结晶得化合物9；c.将第V部分过小硅胶柱，小硅胶柱200～300目，硅胶柱高45cm，柱径2.5cm，柱温室温，氯仿-甲醇梯度洗脱，梯度范围，氯仿-甲醇100％∶0％→85％∶15％；氯仿∶甲醇＝93％∶7％时，将洗脱液浓缩，丙酮溶解，静置24h析出晶体得化合物10；然后再用100％甲醇将第V部分全部洗脱下来，浓缩、丙酮溶解，静置24h，析出晶体为化合物11；d.将第X部分过小硅胶柱，小硅胶柱200～300目，硅胶柱柱高45cm，柱径2.5cm，柱温室温，氯仿-甲醇梯度洗脱，梯度范围，氯仿-甲醇100％∶0％→85％∶15％；氯仿∶甲醇＝85％∶15％时，洗脱液析出晶体，经甲醇重结晶得化合物12；③水饱和的正丁醇萃取配量：固液比为芫花枝条浸膏重量∶水饱和的正丁醇体积＝1∶10～30；每次萃取时，混悬液加芫花枝条浸膏9～10倍量水饱和的正丁醇，室温下搅拌3h；反复萃取3次，合并水饱和的正丁醇萃取液；备用；水饱和的正丁醇萃取液进行硅胶柱层析：硅胶柱高120cm，柱径10cm，柱温室温；氯仿-甲醇梯度洗脱，梯度范围，氯仿-甲醇100％∶0％→60％∶40％，得到I～X 10个部分；将第V部分过小硅胶柱，小硅胶柱200～300目，硅胶柱柱高45cm，柱径2.5cm，柱温室温，氯仿-甲醇梯度洗脱；梯度范围，氯仿-甲醇100％∶0％→60％∶40％；氯仿∶甲醇＝93％∶7％时，得化合物13；氯仿∶甲醇＝90％∶10％时，得化合物14；氯仿∶甲醇＝92％∶8％时，得化合物15。