[发明专利]一种携带木糖代谢相关基因的广宿主质粒及其构建方法无效
申请号: | 200810246561.4 | 申请日: | 2008-12-25 |
公开(公告)号: | CN101475955A | 公开(公告)日: | 2009-07-08 |
发明(设计)人: | 李十中;郑焕娣 | 申请(专利权)人: | 清华大学 |
主分类号: | C12N15/63 | 分类号: | C12N15/63;C12N15/61;C12N15/54;C12N1/21;C12R1/19 |
代理公司: | 北京众合诚成知识产权代理有限公司 | 代理人: | 史双元 |
地址: | 100084北*** | 国省代码: | 北京;11 |
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摘要: | 本发明公开了一种携带木糖代谢相关基因的广宿主质粒及其构建方法,属于分子生物学技术领域。该质粒含有4个木糖代谢相关的酶基因,木糖异构酶(xylA)、木酮糖激酶(xylB)、转醛酶(talA)和转酮糖酶(tktA),均来源于E.coli DH5α菌株。该质粒的构建方法是利用Gateway技术,分别设计xylA、xylB、talA和tktA四种目的基因的特异性引物,以E.coliDH5α为目的基因的来源菌株,通过PCR扩增相应基因;PCR产物与其对应的pDONR载体进行BP重组,获得的入门克隆(Entry clones)与pDEST14进行LR重组,得到pDEST14-ABAT质粒;pDEST14-ABAT质粒用Xba I和Nhe I双酶切的产物ABAT与Xha I单酶切的载体pBBR1MCS2进行连接,得到重组质粒pBBR1MCS2-ABAT。转入该质粒的优良菌种可大大降低纤维素乙醇的生产成本。 | ||
搜索关键词: | 一种 携带 代谢 相关 基因 宿主 质粒 及其 构建 方法 | ||
【主权项】:
1、一种携带木糖代谢相关基因的广宿主质粒,包括四个木糖代谢相关基因,其特征在于该质粒的序列如SEQ ID NO:1所示。
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