[发明专利]球状芽孢杆菌及其所产耐有机溶剂稳定性蛋白酶

摘要

本发明是一种球状芽孢杆菌DS 11(Bacillus sphaericus DS 11)。该菌株为短杆状革兰氏阳性菌，菌株的生长温度范围为4-35℃，最适生长温度为28℃；生长pH范围为4-11，最适生长pH为7；生长的NaCl浓度为0.3％-10％，最适NaCl浓度为3％。可以耐受极性常数(Log P)不大于2.0的有机溶剂。本发明还公开了一种利用上述球状芽孢杆菌产有机溶剂稳定性蛋白酶的方法及按该方法得到的有机溶剂稳定性蛋白酶产品。该蛋白酶耐受有机溶剂的能力较强，可以用于有机相高效催化多肽的合成。

主权项

1.一种球状芽孢杆菌DS11(Bacillus sphaericus DS11)，其特征在于，它采用以下方法进行分离培养，将取自中国黄海连云港海域的海水水样1ml添加到250ml三角瓶装有50mL含10％苯的MLB液体培养基中，用橡胶塞塞住瓶口，28℃，160r/min培养4d后转接到新的MLB液体培养基中，如是3次；将所得培养液稀释105倍后，吸取10μl涂布MLB培养基平板，在28℃培养箱中培养2d，观察菌落形态，划线纯化至纯种后点种于SMA培养基平板，在28℃培养箱中培养2d，初步筛选出菌落直径与透明圈直径的比值大于5的菌株，并将初筛菌株分别接种到产酶发酵培养基，28℃，180r/min培养48h后，4℃下8000g离心10min，测定上清液蛋白酶活性；分别取1mL上清液加入1mL苯，在30℃，180r/min振荡处理1h后检测蛋白酶活力，苯处理前后蛋白酶活性降低最小的菌株即为球状芽孢杆菌DS11(Bacillus sphaericus DS11)。