[发明专利]一种循环超滤-盐析结晶分离精制卵清溶菌酶的方法有效
| 申请号： | 200810219504.7 | 申请日： | 2008-11-28 |
| 公开（公告）号： | CN101418288A | 公开（公告）日： | 2009-04-29 |
| 发明（设计）人： | 胡松青;李琳;桂林;陈玲;张喜梅;李晓玺;李冰 | 申请（专利权）人： | 华南理工大学 |
| 主分类号： | C12N9/36 | 分类号： | C12N9/36 |
| 代理公司： | 广州粤高专利代理有限公司 | 代理人： | 何淑珍 |
| 地址： | 510640广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明提供一种应用循环超滤—盐析结晶分离精制卵清溶菌酶的方法。首先对卵清进行稀释、微滤和超滤等预处理，获得卵清溶菌酶原料液；原料液循环流经切向流超滤器中的膜组件，卵清溶菌酶溶液得到不断分离和浓缩；再利用超滤和盐析结晶集成进一步浓缩卵清溶菌酶溶液；卵清溶菌酶溶液在结晶罐中盐析结晶。应用本发明方法，所获得的溶菌酶晶体粒径大于0.1mm，粒度均匀、形貌完整，具有典型的晶体X-射线衍射峰；比活力可达20,000U/mg以上，酶回收率可达70％以上，纯化因子达25.1。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 循环 超滤 结晶 分离 精制 卵清溶菌酶 方法 | ||
【主权项】：
1、一种循环超滤一盐析结晶分离精制卵清溶菌酶的方法，其特征在于包括以下步骤：(1)卵清的预处理，获得卵清溶菌酶原料液用磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液将卵清稀释6-12倍，使用高压均质机在18-28MPa下均质后，使用0.22μm或0.45μm微滤膜过滤除去固体杂质，然后用截留分子量为20-40kD的超滤膜过滤，滤出液即为卵清溶菌酶原料液；(2)卵清溶菌酶原料液的分离和浓缩在20-50℃、操作压力为0.10-0.45MPa下在切向流超滤装置中不断循环超滤卵清溶菌酶原料液，至卵清溶菌酶原料液的溶菌酶含量为1-4％(w/v)；(3)超滤和盐析结晶集成进一步浓缩卵清溶菌酶原料液然后在卵清溶菌酶原料液中添加NaCl至NaCl浓度为1-4％(w/v)，在切向流超滤装置中，在20-50℃、操作压力0.10-0.45MPa下继续超滤浓缩至卵清溶菌酶原料液中溶菌酶含量为3-6％(w/v)；(4)卵清溶菌酶在结晶罐中盐析结晶将切向流超滤装置的截留液排入结晶罐，添加NaCl至NaCl在卵清溶菌酶原料液中的浓度为3-6％(w/v)，结晶温度为25-35℃，搅拌，使溶菌酶在结晶罐中成核并养晶至晶体不再长大，离心分离晶浆中的晶体，真空干燥，即可得到本发明的溶菌酶晶体。
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- 本发明公开了一种来源于鸡蛋溶菌酶的抗菌肽混合物及其制备方法和应用，属于分子生物学技术领域。所述抗菌肽混合物的制备方法，包括：利用碱性蛋白酶对鸡蛋溶菌酶进行酶解得到粗提物，经分离纯化，收集具有抗菌活性的纯化产物，获得所述的抗菌肽混合物。本发明利用碱性蛋白酶对鸡蛋溶菌酶进行酶解，其酶解产物对金黄色葡萄球菌的抑菌活性较鸡蛋溶菌酶的抑菌活性提高了40％，其抗菌活性显著提升，扩大了鸡蛋溶菌酶的应用范围；本发明提供的制备工艺具有简单、快速、高效的特点，适合工业化生产。
- 一种溶菌酶的发酵方法-201811346353.1
- 谢渊;罗漫杰;杨广宇 - 武汉瀚海新酶生物科技有限公司
- 2018-11-13 - 2019-01-18 - C12N9/36
- 本发明公开了一种溶菌酶的发酵方法，步骤一：装柱，阳离子交换树脂CM‑Sephdex用稀缓冲盐水溶液浸泡一昼夜，并不时轻轻搅动使之平衡，在与此溶剂平衡期间，让装柱的CM‑Sephdex材料沉降，用倾泻法除掉悬液中漂浮的小颗粒，然后装柱，注意装柱时不要夹入气泡，柱的大小视加工规模而定；步骤二：收集提取液，收集鸡蛋清，用双层纱布过滤以除去碎蛋壳及胚索后，按其体积的两倍量加入水，小心搅拌使其混合，需要注意的是，涉及溶菌酶发酵技术领域。该溶菌酶的发酵方法，通过结晶经分离、干燥后即为溶菌酶成品，纯度不足，通过重结晶方法进一步纯化，将溶菌酶附属的溶质溶于溶剂后，将溶剂进行吸附后，将溶质进行重结晶便可以纯化。
- 一种利用鸡蛋清生产溶菌酶晶体的方法-201810959893.0
- 雷文彩;左文海;蒋有德 - 雷文彩;雷晋宁;周启真;雷中国
- 2018-08-20 - 2018-12-14 - C12N9/36
- 一种利用鸡蛋清生产溶菌酶晶体的方法，包括1)材料选择与预处理，2)吸附，3)洗脱，4)盐析，5)结晶等步骤，其特点是树脂：500g724树脂用氢氧化钠溶液50g浸泡1‑2小时，然后用蒸馏水冲洗至pH14；再用pH6.5的磷酸盐缓冲液浸泡8小时；聚丙烯酸：用少许磷酸盐缓冲液溶解分析纯为38％的聚丙烯酸；选择土陶罐、陶瓷或搪瓷容器。本发明将鸡蛋清直接应用于实际生产，生产的溶菌酶晶体具有质量稳定、感观良好、酶活性较高，且晶体产量高，在提高经济效益的同时还降低了生产成本。具检验测定，本发明生产的溶菌酶晶体活力达到68.81lu/mg，是现有技术生产出来的溶菌酶活力20lu/mg的3倍多。
- 高原特种养殖珍禽蛋蛋清溶菌酶的制备方法-201810052257.X
- 冯全忠;邓玉林;孟薇薇;李月海;曲淑华;索文敏;戴荣继;陈艳;孟世英;胡志成;孙俐丽 - 青海华杰实业有限公司;北京理工亘元科技有限公司
- 2018-01-18 - 2018-08-14 - C12N9/36
- 本发明提供了一种高原特种养殖珍禽蛋蛋清溶菌酶的制备方法，涉及生物提取技术领域。上述高原特种养殖珍禽蛋蛋清溶菌酶的制备方法通过将pH为5～7的蛋清加工液加入Na+弱酸性阳离子交换树脂进行吸附处理，并与超滤法相结合进行浓缩除盐，对蛋清中的溶菌酶进行提取。该方法制得的溶菌酶，其成品酶比活大于30000U/mg，纯度大于98％，成品得率大于4‰(蛋清质量)，同时该方法具有提取工艺稳定，可重复性好的优点，有效缓解了现有制备方法提取工艺不稳定以及溶菌酶纯度低、酶活力低等问题。
- 一种新型内溶素多肽-201680060390.9
- M·J·勒斯纳;F·艾兴泽埃尔 - 迈克瑞欧斯人体健康有限公司
- 2016-09-12 - 2018-06-08 - C12N9/36
- 本发明涉及医学领域，具体涉及与葡萄球菌感染相关的病症的治疗领域。本发明涉及特异性靶向细菌葡萄球菌细胞的新型内溶素多肽。本发明进一步涉及所述内溶素多肽用于医学用途，优选用于治疗患有与葡萄球菌感染相关病症的个体。
- 专利分类
