[发明专利]一种固定化乙酰胆碱酯酶电化学生物传感器的制备

摘要

本发明涉及一种电化学生物传感器的制备方法，特别涉及一种固定化乙酰胆碱酯酶方法及电流型生物传感器的制备方法。即利用电沉积技术将带有负电荷的碳纳米管沉积到玻碳电极表面，随后在聚二烯丙基二甲基氯化铵溶液和碳纳米管分散液中进行层层静电自组装过程，得到自组装效率高、修饰层稳定的修饰电极。然后，在聚二烯丙基二甲基氯化铵溶液和胆碱酯酶的PBS(磷酸盐缓冲液)溶液中再进行层层自组装，得到稳定性较高的固定化乙酰胆碱酯酶电流型生物传感器，可以在常温下，迅速而稳定地检测残留农药中的对硫磷浓度。

主权项

1.一种固定化乙酰胆碱酯酶电化学生物传感器的制备方法，其特征在于包括下列步骤：(1)玻碳电极经过抛光、在pH5.00～8.00的磷酸盐缓冲液中循环伏安扫描10圈进行电化学活化预处理后，与铂电极组成两电极系统电沉积2小时，形成亮黑色的带有大量负电荷的碳纳米管电沉积层；(2)将步骤(1)中经过电沉积后的玻碳电极浸入到离子强度为0.8mol·L-1的1％的聚二烯丙基二甲基氯化铵溶液中，进行聚二烯丙基二甲基氯化铵的静电自组装，10～15min后取出用去离子水仔细冲洗2min，再浸入到pH7.0～10.0的四硼酸钠溶液作为分散剂的浓度为0.5～1.5g·mL-1碳纳米管的分散液中，进行碳纳米管的静电自组装，15min后取出，用去离子水小心冲洗2min，至此，碳纳米管修饰层为1层，反复操作，直到碳纳米管的修饰层层数为5，最后，将得到的最外层为多壁碳纳米管的电极在红外灯下烘干；(3)将步骤(2)中的所得的红外灯下烘干后的电极浸入到离子强度为0.8mol·L-1的1％的聚二烯丙基二甲基氯化铵溶液中，进行聚二烯丙基二甲基氯化铵的静电自组装，15min后取出用去离子水仔细冲洗2min，再浸入到pH为5.00～8.00的胆碱酯酶的磷酸缓冲溶液分散液中，进行碳纳米管的静电自组装，15min后取出，用去离子水小心冲洗2min，至此，胆碱酯酶修饰层为1层，反复操作，直到胆碱酯酶的修饰层层数为3，为了更好的将酶固定，继续将电极浸入聚二烯丙基二甲基氯化铵溶液中5min，即得固定化乙酰胆碱酯酶电化学生物传感器。