[发明专利]从牧草尖叶胡枝子中提取和纯化总黄酮及其单体分离方法

摘要

本发明公开一种从牧草尖叶胡枝子中提取和纯化总黄酮及其单体分离的方法，该方法将尖叶胡枝子全草洗净，烘干，粉碎，乙醇加热回流提取，提取液浓缩为稀酒精溶液，石油醚萃取法清除叶绿素，将萃取后的溶液减压浓缩除去残余的酒精后，依次用乙酸乙酯与正丁醇萃取，回收溶剂，乙醇转溶，减压浓缩，喷雾干燥得到尖叶胡枝子提取物。然后分别过正相硅胶柱，聚酰胺柱，得黄色沉淀即为尖叶胡枝子总黄酮，并对总黄酮进行了单体化合物的分离，经质谱仪与核磁共振色谱对其结构进行了鉴定，分别是荭草素、异荭草素、牡荆苷、异牡荆苷、异杨梅树皮苷、槲皮素－3－O－葡萄糖苷。本发明流程简单，设计合理，提取效率高，得到的产品纯度高，有利于工业化生产。

主权项

1.一种从牧草尖叶胡枝子中提取和纯化总黄酮及其单体分离方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤一，选择9～10月采收的尖叶胡枝子全草或带根全草，洗净烘干，粉碎至60～100目，得到尖叶胡枝子草粉；步骤二，对尖叶胡枝子草粉放入多功能提取罐内加热回流提取，溶剂选择浓度70％的乙醇水溶液，尖叶胡枝子草粉与乙醇水溶液的比例为1：20、提取三次，每次提取时间为2h，合并乙醇提取液，减压浓缩到原体积的1/2；步骤三，将乙醇提取液与等体积石油醚连续萃取5次，清除其中叶绿素；步骤四，将除完叶绿素的提取液70℃下减压浓缩，除去乙醇，浓缩至原体积的1/3；步骤五，浓缩后的提取液用乙酸乙酯萃取至乙酸乙酯层无色；合并乙酸乙酯萃取液，减压浓缩得乙酸乙酯萃取液浸膏；步骤六，乙酸乙酯萃取后的水层继续用正丁醇萃取，萃取至正丁醇部无色，合并正丁醇萃取液，减压浓缩得正丁醇萃取液浸膏；步骤七，将乙酸乙酯浸膏过正相硅胶柱，以氯仿：甲醇为80:20进行洗脱，蒸干溶剂，乙醇转溶，洗脱过滤得到黄色沉淀和滤液两部分，其中：黄色沉淀中含有的黄酮纯度达98％，TCL结果显示该黄色沉淀为两个化合物的共沉物，将黄色沉淀上凝胶柱，得到两个黄酮单体，分别为化合物荭草素和牡荆苷；将滤液浓缩成浸膏，上80～100目的聚酰胺柱，依次用不同浓度的乙醇水溶液梯度洗脱，据TCL结果，黄酮集中于30％和50％的乙醇水溶液部，合并浓缩30％和50％乙醇水溶液部，得黄色粉末，该黄色粉末的黄酮纯度为95％；步骤八，将正丁醇萃取液浸膏过大孔吸附树脂，用不同浓度的乙醇水梯度溶液洗脱，根据TCL结果显示，黄酮部集中于30％与50％浓度的乙醇水溶液部，合并30％流分、50％流分，浓缩得黄色粉末，该黄色粉末的黄酮纯度高达95％；步骤九，分别对步骤七、步骤八两部分的黄色粉末沉淀，点板，据TCL结果合并，取此黄色粉末，依次通过凝胶柱、反相柱及高效液相制备色谱得到的化合物经结构鉴定分别是异荭草素，异牡荆苷、异杨梅树皮苷、槲皮素-3-O-葡萄糖苷。