[发明专利]从牧草尖叶胡枝子中提取和纯化总黄酮及其单体分离方法

说明书

技术领域

本发明属于一种牧草的深开发与利用领域，具体地说是一种从优质牧草尖叶胡枝子中提取及纯化总黄酮并将总黄酮进行单体分离的方法，并将分离得到的总黄酮单体通过核磁共振光谱及质谱进行结构鉴定。

背景技术

胡枝子属(Lespedeza Michx)是豆科(Leguminosae)蝶形花亚科中一个较大的属，全世界约60余种，分布于东亚至澳大利亚东北部及北美。我国产26种，除新疆外，广布于全国各省区。该属植物中约有一半以上的种作为民间草药使用。有清热解毒、润肺止咳、利水消肿、活血止痛之功，主要用于治疗感冒发烧、肺热咳嗽、跌打损伤、风湿痹痛、淋症、遗尿及蛇伤等。其中，胡枝子(L.bicolor)、截叶铁扫帚(Lcuneata)等，早在《救荒本草》、《分类草药性》、《滇南本草》中就有记载。胡枝子属植物含黄酮、生物碱、萜类、甾醇、有机酸、鞣质等多种化学成分，具有抗炎、抗过敏、抗早孕、镇痛等药理活性，特别是黄酮类化合物对，肾功能不全的治疗作用尤为显著。上世纪六、七十年代国内外就有科研人员开展了对其化学成分的研究，发现黄酮类是主要的次生代谢产物，并已从该属的圆叶胡枝子、兴安胡枝子、截叶铁扫帚、头状胡枝子、短梗胡枝子、大叶胡枝子、山豆花、美丽胡枝子中分离出64种黄酮类化合物。

尖叶胡枝子(Lespedaza hedysaroides(Pall.)Kitag.)为中旱生草本状小半灌木，在森林和森林草原带的草甸草原群落中常成为优势种或伴生种，为草原带的山地灌丛伴生成分。由于尖叶胡枝子具有抗旱、耐寒、耐瘠薄及适应性广等特性，是良好的水土保持植物，并且具有返青早、枯黄晚、叶量大、营养价值高、适口性好等特点，是改良干旱、半干旱区退化草地和建植人工草地的优良牧草，作为生态草和优良牧草，近年来受到格外重视。《全国中草药汇编》中记载尖叶胡枝子全株入药，苦，微寒，可止泻利尿，止血，主治痢疾，遗精，吐血，子宫下垂。

发明内容

本发明的目的在于，提供一种从牧草尖叶胡枝子中提取和纯化总黄酮的方法，该方法的总黄酮提取率高，工艺简单，为优质牧草尖叶胡枝子进一步深开发提供技术路线；同时对总黄酮进行单体的分离，为尖叶胡枝子的深开发提供药理活性依据。

为了实现上述任务，本发明采取如下的技术解决方案：

一种从牧草尖叶胡枝子中提取和纯化总黄酮的方法，其特征在于，包括如下步骤：

称取尖叶胡枝子草粉2.5kg，在60℃的提取温度下，以70％的乙醇作为提取溶剂，提取固液比为1∶20，提取3遍，每次提取2小时，合并提取液，过滤并减压浓缩至原来体积的1/2；

将浓缩后的提取液用等体积的石油醚萃取5次，除去乙醇，浓缩至原体积的1/3；

用乙酸乙酯萃取至乙酸乙酯层无色，合并乙酸乙酯部，减压浓缩成乙酸乙酯萃取液浸膏；

将乙酸乙酯萃取液浸膏萃取后的水部用正丁醇萃取至正丁醇无色，合并浓缩得正丁醇萃取液浸膏；

将乙酸乙酯萃取液浸膏过正相硅胶柱，氯仿∶甲醇为80∶20洗脱，TCL跟踪，据TCL结果将黄酮集中部分的进行合并，洗脱过滤得到黄色沉淀，黄酮纯度达97％；将滤液浓缩成浸膏，上80-100目的聚酰胺柱依次用乙醇水溶液30％与50％梯度洗脱，据TCL结果，黄酮集中部合并浓缩得黄色粉末，黄酮纯度高达96.5％；

将正丁醇萃取液浸膏，过大孔吸附树脂，用30％与50％浓度的乙醇溶剂水梯度洗脱，据TCL结果将黄酮部合并浓缩，上80-100目的聚酰胺柱，30％、50％乙醇水梯度洗脱，据TCL合并流分，浓缩得黄色粉末，其黄酮纯度达98％。

本发明选取分布于内蒙古自治区的尖叶胡枝子以黄酮的生理功能为出发点，对尖叶胡枝子的总黄酮提取的工艺进行研究，并对其总黄酮进行了单体分离，并对得到的化合物进行了结构鉴定。结果表明：尖叶胡枝子中的总黄酮主要含有荭草素，异荭草素、牡荆苷，异牡荆苷的碳苷黄酮，其中含量占总黄酮含量的90％。另外异杨梅树皮苷、槲皮素-3-O-葡萄糖苷等氧苷黄酮，占总黄酮的比例较小。其具体结构如下：

荭草素C21H20O11                            异荭草C₂₁H₂₀O₁₁

牡荆vitexin C₂₁H₂₀O₁₀                      异牡荆苷isovitexin C₂₁H₂₀O₁₀