[发明专利]一种生产虫草素的方法及高产蛹虫草菌株BYB－08的选育与应用

摘要

本发明属于农业微生物技术领域。具体涉及一种生产虫草素的方法，高产蛹虫草菌株的选育与应用。本发明通过诱变选育得到一株高产蛹虫草(Cordyceps militaris)菌株BYB－08，该菌株作为专利程序已于申请日前保藏在中国典型培养物保藏中心(保藏号为：CCTCC NO：M207091)。本发明公开了本发明获得的蛹虫草菌株BYB－08在优化的深层发酵和静置表层发酵培养相结合的方法中的成功实施例，本发明所获得的发酵液中虫草素含量比现有专利文献和非专利文献报道的方法所获得的虫草素生物学产量有非常明显的提高。

主权项

1、一种生产虫草素的方法，其特征在于，采用液体深层发酵和表层发酵相结合的方法进行发酵，其步骤如下：(1)将保藏号为CCTCC NO：M207091的蛹虫草菌株BYB-08，接种于固体培养基的平皿内，于20～28℃避光培养15d，再用散射光培养5d，用无菌水洗下分生孢子制成分生孢子悬液，备用；(2)将步骤(1)得到的分生孢子悬液接入发酵罐的液体发酵培养基中，接种量按孢子悬液与液体培养基体积比为1～2％的量接入；(3)按照所述的液体深层发酵和表层发酵相结合的方法培养步骤(2)的培养物：在发酵培养起始阶段，控制发酵罐通气量为120～170ml/min，搅拌速度为150rpm～200rpm，温度为23～27℃，培养3～4d后，待发酵液中还原糖浓度为0.05～0.09g/L时停止深层搅拌发酵，将发酵液转移至容器口盖有灭菌纱布的广口容器中，控制发酵温度为23～27℃，静止表层发酵16～20d后停止发酵，得到含虫草素的发酵原液；(4)将步骤(3)得到的虫草素发酵原液以3000rpm，25℃离心30分钟，取上清液，将该上清液经减压浓缩至发酵原液体积的1/10左右，加入3倍体积的95％乙醇，去除其中的沉淀物，将剩余的发酵原液贮藏在2℃条件下，采用5000rpm离心10min后取上清，再经减压蒸出乙醇，将其浓缩至发酵原液体积的1/5左右，去除其中的蛋白，得到初步提纯的虫草素溶液，其中：步骤(1)所述的固体培养基组分为：按重量体积计，马铃薯浸出粉20g，葡萄糖20g，蛋白胨15g，KH2PO4 1g，MgSO4 0.5g，VB1 10mg，琼脂粉20g，补充自来水至1000ml，调pH至6.5～7.5；步骤(2)在发酵罐中的液体培养基按照重量体积计为：葡萄糖2％，豆粕8％，马铃薯浸出粉2％，腺苷0.6％，KH2PO4 0.2％，MgSO4 0.1％，补充自来水至100％，调pH至6.5～7.0，备用。