[发明专利]一种弓形虫感染早期检测的方法

摘要

本发明涉及一种弓形虫感染早期检测的方法。弓形虫三磷酸核苷水解酶－II(NTPase－II)是弓形虫利用宿主细胞补救合成嘌呤途径中不可或缺的关键性酶，对弓形虫的寄生和繁殖都具有重要的作用，也是弓形虫急性感染阶段引起机体产生免疫反应的主要抗原。本发明是利用聚合酶链反应将弓形虫三磷酸核苷水解酶－II基因扩增，插入表达载体中构建重组表达质粒，将重组表达质粒转入原核细胞进行表达，得到重组融合蛋白NTPase－II，利用重组蛋白NTPase－II作为包被抗原建立间接ELISA法，作为对弓形虫感染的早期检测方法。

主权项

1、一种弓形虫感染早期检测的方法，其特征在于由以下步骤组成：1)用碳酸缓冲液稀释纯化后的NTPase-II制成5μg/ml的包被液，100μl/孔包被96孔酶标板，4℃包被过夜；2)PBST洗板3-5次，2-3min/次，拍干；3)加5％的脱脂奶粉，37℃封闭2h；4)PBST洗板5-7次，2-3min/次，拍干；5)加入稀释度为1∶100的被检血清，100μl/孔，37℃孵育1.5h；6)PBST洗板5-7次，2-3min/次，拍干；7)加入稀释度为1∶4000的羊抗鼠酶标二抗IgM，100μl/孔，37℃孵育1h，PBST洗板5-7次，2-3min/次，拍干；8)加入底物显色液A液和B液，37℃避光显色10-15min，加终止液，50μl/孔；9)酶标仪读数，450nm处空气调零后测OD值，以阴性血清的OD450nm平均值和3倍标准差之和作为阴性血清的上限，当血清的OD450nm ≥X+3S者即判断为阳性血清，反之则为阴性。