[发明专利]一种人参果脱毒组培苗的病毒快速检测方法

摘要

本发明涉及一种人参果脱毒组培苗的病毒快速检测方法，属植物病毒检测技术领域，包括如下步骤：培养基的配制、茎尖脱毒培养、指示植物番茄的无菌苗培养、微嫁接培养和脱病毒组培苗的增殖培养。本发明的优点是：所用的培养基、组培条件和微嫁接器适于人参果脱毒苗的微嫁接培养，利于嫁接口的愈合，平均嫁接成功率超过90％，可完全满足病毒检测的要求。与传统的田间指示植物检测相比，大大缩短了检测所需的时间。该种方法不受时间限制、环境因素的影响，可常年在实验室条件下进行，非常实用，可用于人参果脱毒苗的病毒快速检测和脱毒苗的规模化生产。

主权项

1、一种人参果脱毒组培苗的病毒快速检测方法，其特征在于：该方法按以下步骤进行：1)、培养基的配制，包括基本培养基和组培各阶段培养基的各组分与每升所含重量为：(1)基本培养基：选用MS培养基或1/2MS培养基，蔗糖或白糖20～40g/L，琼脂7～9g/L，pH5.6～5.8；(2)诱导培养基：MS+BA 0.5～2.0mg/L+IAA 0.05～0.5mg/L；(3)微扦插培养基：MS+BA 0.1～1.0mg/L+NAA 0.05～0.5mg/L；(4)壮苗培养基：MS+BA0.05～0.5mg/L+NAA0.01～0.1mg/L+PP3330.1～0.5mg/L；(5)微嫁接培养基：MS+BA 0.05～0.5mg/L+IBA 0.05～0.5mg/L；(6)生根培养基：1/2MS+NAA 0.05～0.5mg/L；(7)无菌播种培养基：1/2MS；2)、人参果茎尖脱毒培养：(1)外植体的选取与灭菌：剪取顶芽或带腋芽茎段为外植体，经灭菌处理，作为脱毒组培用的外植体；(2)茎尖培养：将灭菌处理后的顶芽或带腋芽茎段在无菌条件下，在双筒解剖镜下，摘出0.2～0.3mm大小的带1～2个叶原基的茎尖，接种在诱导培养基上，在培养条件下培养20～30天后，从茎尖诱导形成幼芽，再培养20～30天，培养成3～5节、高5～7cm的幼苗；(3)微扦插培养：将诱导形成的幼苗切成一节一芽、3～5节转接到微扦插培养基上，在培养条件下培养30～45天每节又培养成3～5节、高5～7cm的幼苗；根据对幼苗数量的需求，每隔30～45天按同样方法进行幼苗再微扦插培养；(4)壮苗培养：将微扦插培养成3～5节、高5～7cm的幼苗切成一节一芽、3～5节接种到壮苗培养基上，在培养条件下培养30～45天，幼苗2～3节、高3～5cm、茎变粗；3)、指示植物番茄的无菌苗培养：(1)外植体的选取与灭菌：取番茄的种子，经灭菌处理，作为无菌播种的外植体；(2)无菌播种培养：将灭菌处理后的种子接种在无菌播种培养基上，在培养条件下培养20～30天后，从种子培育成高5～7cm的幼苗；(3)微扦插培养：将诱导形成的幼苗切成一节一芽、3～5节转接到微扦插培养基上，在培养条件下培养30～45天每节又培养成3～5节、高5～7cm的幼苗；根据对幼苗数量的需求，每隔30～45天按同样方法进行幼苗再微扦插培养；4)、微嫁接培养：(1)微嫁接砧木准备：将步骤2)人参果茎尖脱毒培养的幼苗在无菌操作条件下切成一个个带腋芽的茎段，将腋芽去掉并在茎段的上部纵切一个长0.5cm的切口，作为微嫁接砧木；(2)微嫁接接穗准备：将步骤3)无菌苗培养的指示植物番茄的幼苗切成带单芽的茎段，芽上面的部分留0.3～0.5cm，芽下面的部分留0.5～1.0cm，并将其下部削成楔形，削面长0.3cm，作为微嫁接接穗；(3)微嫁接器准备：将步骤2)人参果茎尖脱毒培养的幼苗在无菌操作条件下切成一个个长1.5cm的不带腋芽的茎段，用解剖刀在茎段中间纵切一个长0.5cm的开口；(4)微嫁接：将微嫁接器套入微嫁接砧木的切口下方，然后将微嫁接接穗插入微嫁接砧木上端的纵切口中，最后将微嫁接砧木的切口下方的微嫁接器往上移至微嫁接砧木的切口处，将微嫁接砧木的切口和微嫁接接穗固定牢；(5)微嫁接苗培养：将嫁接苗接种到微嫁接培养基中进行培养，在培养条件下经45～60天的培养，指示植物苗生长正常、无病毒病的症状的为脱病毒苗；指示植物表现出病毒病的症状的为未脱除病毒苗；5)、脱病毒组培苗的增殖培养：(1)微扦插培养：将步骤4)检测出脱病毒的同一编号的组培苗切成一节一芽、3～5节转接到微扦插培养基上，在培养条件下培养30～45天每节又培养成3～5节、高5～7cm的幼苗；根据对幼苗数量的需求，每隔30～45天按同样方法进行幼苗再微扦插培养；(2)壮苗培养：将微扦插培养成约3～5节、高5～7cm的幼苗切成一节一芽、约3～5节接种到壮苗培养基上，在培养条件下培养30～45天，幼苗约2～3节、高3～5cm、茎变粗；(3)生根培养：将培养的壮苗接种在生根培养基中进行生根培养，在培养条件下培养20～30天后，幼苗长高成5～7cm、苗基部长出5～10根细根；(4)移栽：将生根组培苗移栽于基质中，培育1～2个月至成苗；(5)定植：将移栽苗定植在大田中，培育6～10个月至植株。