[发明专利]一种人参果脱毒组培苗的病毒快速检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及植物脱毒组培快繁技术领域，尤其涉及一种人参果脱毒组培苗的病毒快速检测方法。

背景技术

人参果(Solamun muricatum Ait)又名香艳果，为茄科直立多年生草本或亚灌木，原产南美洲的秘鲁、厄瓜多尔地区。其性喜温暖、凉爽、干燥气候，生长适温18～20℃。人参果以浆果供食，低糖、低脂，可炒、烧、炸、做汤、鲜食等。据分析，其果实富含人体所需的维生素及各种微量元素：铜、钾、镁、硒等。食用人参果，对各种癌症、高血压、糖尿病、冠心病等有较好的防治效果，被誉为抗癌之王、绿色保健珍品。近年来国内引进推广种植，且适应性广、抗逆性强，生产效益高，市场前景好。人参果常规栽培以茎段扦插繁殖为主，但幼苗和成株极易感染烟草花叶病毒、黄瓜花叶病毒和马铃薯M病毒等多种病毒，体内病毒感染严重，并逐代积累，严重影响其生长发育，表现为叶片皱缩、变小，死亡率较高，坐果率低，产量大幅度下降。通过植物茎尖脱毒培养进行种苗脱毒和快速繁殖是生产无病毒种苗的有效途径。

无毒苗生产需要快速、灵敏、特异的检测方法。指示植物检测是一种准确、可靠的检测方法，至今人参果病毒病的检测仍主要依靠于指示植物检测，按照常规做法，首先必须将试管苗进行生根培养，移栽成活后才能用指示植物进行检测，并以指示植物检测的结果作为判断待检植物是否带毒的最终依据。但这种方法费时较长，需要1年的时间才能完成，并且病毒病的症状表现易受环境因素的影响。因此需要寻找更好的人参果脱毒组培苗的病毒快速检测方法。

发明内容

本发明要解决上述现有技术的缺陷，提供一种人参果脱毒组培苗的病毒快速检测方法。

本发明目的通过以下技术方案来实现：这种人参果脱毒组培苗的病毒快速检测方法，按如下步骤进行：

1)、培养基的配制，包括基本培养基和组培各阶段培养基的各组分与每升所含重量为：

(1)基本培养基：选用MS培养基或1/2MS培养基，蔗糖或白糖20～30g/L，琼脂7～9g/L，pH5.6～5.8；

(2)诱导培养基：MS+BA 0.5～2.0mg/L+IAA 0.05～0.5mg/L；

(3)微扦插培养基：MS+BA0.1～1.0mg/L+NAA0.05～0.5mg/L；

(4)壮苗培养基：MS+BA 0.05～0.5mg/L+NAA 0.01～0.1mg/L+PP₃₃₃ 0.1～0.5mg/L；

(5)微嫁接培养基：MS+BA 0.05～0.5mg/L+IBA 0.05～0.5mg/L；

(6)生根培养基：1/2MS+NAA 0.05～0.5mg/L；

(7)无菌播种培养基：1/2MS。

2)、人参果茎尖脱毒培养：

(1)外植体的选取与灭菌：从盆栽植株或大田植株上剪取顶芽或带腋芽茎段为外植体，经灭菌处理，作为脱毒组培用的外植体；

(2)茎尖培养：将灭菌处理后的顶芽或带腋芽茎段在无菌条件下，在40倍的双筒解剖镜下，摘出0.2～0.3mm大小的带1～2个叶原基的茎尖，接种在诱导培养基上，在培养条件下培养20～30天后，从茎尖诱导形成幼芽，再培养20～30天，茎不断抽长，培养成约3～5节、高5～7cm的幼苗；

(3)微扦插培养：将诱导形成的幼苗切成一节一芽、约3～5节转接到微扦插培养基上，在培养条件下培养30～45天每节又培养成约3～5节、高5～7cm的幼苗；根据对幼苗数量的需求，每隔30～45天按同样方法进行幼苗再微扦插培养；

(4)壮苗培养：将微扦插培养成约3～5节、高5～7cm的幼苗切成一节一芽、约3～5节接种到壮苗培养基上，在培养条件下培养30～45天，幼苗约2～3节、高3～5cm、茎变粗；

3)、指示植物番茄的无菌苗培养：

(1)外植体的选取与灭菌：取番茄的种子，经灭菌处理，作为无菌播种的外植体；

(2)无菌播种培养：将灭菌处理后的种子接种在无菌播种培养基上，在培养条件下培养20～30天后，从种子培育成高约5～7cm的幼苗；

(3)微扦插培养：将诱导形成的幼苗切成一节一芽、约3～5节转接到微扦插培养基上，在培养条件下培养30～45天每节又培养成约3～5节、高5～7cm的幼苗；根据对幼苗数量的需求，每隔30～45天按同样方法进行幼苗再微扦插培养。

4)、微嫁接培养：

(1)微嫁接砧木准备：将步骤2)人参果茎尖脱毒培养的幼苗在无菌操作条件下切成一个个带腋芽的茎段，用解剖刀将腋芽小心的去掉，并在茎段的上部纵切一个长约0.5cm的切口，作为微嫁接砧木；