[发明专利]2型糖尿病疫苗的构建和制备方法

摘要

本发明提供一种2型糖尿病疫苗的构建和制备方法，将添加起始密码子ATG的人RBP－4活性蛋白编码基因插入T7噬菌体DNA衣壳蛋白10B编码基因的3’端，使人RBP－4蛋白与T7 10B表达成融合蛋白，构建成为重组噬菌体RBP/T7，并进一步制备成重组噬菌体疫苗，免疫机体，刺激产生针对RBP－4的特异性抗体，调节体内的RBP－4水平，从而达到控制血糖的目的。经试验，构建的重组噬菌体疫能够有效降低KKAy小鼠血糖、甘油三酯和胆固醇，并能有效地保护KKAy小鼠，避免了其血糖水平的升高，同时增强了KKAy小鼠对葡萄糖灌胃和胰岛素注射的耐受性。因此用它治疗2型糖尿病，可彻底改变传统药物治疗存在的诸多不足或问题。

主权项

1、一种2型糖尿病疫苗的构建方法，其特征在于经过下列步骤：(1)在蛋白编码序列如下的人视黄醇结合蛋白-4的编码序列前添加启动密码子ATG：GAACGTGATTGCCGTGTGAGCAGCTTTCGTGTGAAAGAAAACTTTGATAAAGCGCGTTTTAGCGGCACCTGGTATGCGATGGCGAAAAAAGATCCGGAAGGCCTGTTTCTGCAGGATAACATTGTGGCGGAATTTAGCGTGGATGAAACCGGCCAGATGAGCGCGACCGCGAAAGGCCGTGTGCGTCTGCTGAACAACTGGGATGTGTGCGCGGATATGGTGGGCACCTTTACCGATACCGAAGATCCGGCGAAATTTAAAATGAAATATTGGGGCGTGGCGAGCTTTCTGCAGAAAGGCAACGATGATCATTGGATTGTGGATACCGATTATGATACCTATGCGGTGCAGTATAGCTGCCGTCTGCTGAACCTGGATGGCACCTGCGCGGATAGCTATAGCTTTGTGTTTAGCCGTGATCCGAACGGCCTGCCGCCGGAAGCGCAGAAAATTGTGCGTCAGCGTCAGGAAGAACTGTGCCTGGCGCGTCAGTATCGTCTGATTGTGCATAACGGCTATTGCGATGGCCGTAGCGAACGTAACCTGCTG；(2)将添加起始密码子ATG的人RBP-4蛋白基因片段的5’端引入EcoRI的酶切位点GAATTC，3’端引入HindIII酶切位点AAGCTT，合成插入pGEM-T载体，构建重组质粒RBP/T；(3)将合成构建得到的质粒RBP/T转化大肠杆菌TOP10F’感受态细胞，克隆扩增，大量提取质粒RBP/T；(4)从质粒RBP/T上用EcoRI和HindIII双酶切下目的片段，插入T7 Select 10-3b多克隆位点的EcoR I和HindIII之间，使其正好位于T7 10B基因的3’端，使人RBP-4蛋白与T7 10B表达成融合蛋白，构建成为重组噬菌体RBP/T7。