[发明专利]定点突变的人胰岛素原基因及其腺病毒重组载体无效
| 申请号： | 200810052657.7 | 申请日： | 2008-04-08 |
| 公开（公告）号： | CN101555478A | 公开（公告）日： | 2009-10-14 |
| 发明（设计）人： | 韩忠朝;石琳 | 申请（专利权）人： | 中国医学科学院血液学研究所 |
| 主分类号： | C12N15/17 | 分类号： | C12N15/17;C12N15/861 |
| 代理公司： | 天津才智专利商标代理有限公司 | 代理人： | 王晓红 |
| 地址： | 300020*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种定点突变的人胰岛素原基因及其腺病毒重组载体，(1)RT-PCR方法从正常流产胎儿胰腺组织获取野生型人胰岛素原cDNA；(2)重叠延伸PCR方法在人胰岛素原cDNA上制造两个突变位点，以使其可以被蛋白酶Furin切割成熟，该突变型胰岛素原cDNA片段命名为胰岛素-M2(INS-M2)；(3)将INS-M2克隆至腺病毒载体系统的穿梭载体的多克隆位点(Hind III和XhoI)上，并与骨架载体共转染至BJ5183细菌内，通过细菌内同源重组得到重组载体。本发明使人胰岛素原基因在非β细胞内可以表达为成熟的胰岛素分泌出来成为可能，为高效的转染处于非分裂期的细胞奠定了基础。 | ||
| 搜索关键词： | 定点 突变 胰岛素 基因 及其 病毒 重组 载体 | ||
【主权项】：
1、一种定点突变的人胰岛素原基因，其特征在于，通过重叠延伸PCR方法在人胰岛素原cDNA上制造两个突变位点163-164和263位点，使其被蛋白酶Furin切割成熟，获得定点突变的人胰岛素原基因。
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