[发明专利]基于金纳米探针和核酸适配子无标记比色测定凝血酶的方法

摘要

本发明涉及基于基于金纳米探针和核酸适配子无标记比色测定凝血酶的方法，属于分析化学技术领域。未结合凝血酶的核酸适配子处于自由伸展状态，此单链的核酸适配子能够稳定金纳米保护其不被所加入的盐聚集，此时金纳米为酒红色；相反，结合凝血酶后的核酸适配子呈“四极子/双螺旋”结构，无法与金纳米作用，故不能保护盐诱导的金纳米聚集，此时金纳米为天蓝色。这样，通过金纳米颜色的变化，能够实现凝血酶的检测。本发明方法对于凝血酶的检出限为0.83纳摩尔每升，线性范围是0纳摩尔每升到167纳摩尔每升。此种比色方法检测凝血酶，选择性高、灵敏度高、操作简单、无需复杂仪器。

主权项

1、基于金纳米探针和核酸适配子无标记比色测定凝血酶的方法，其特征在于，步骤和条件如下：(1)用参考文献方法合成13nm的金纳米探针(参考文献：Grabar，K，C.；Freeman，R.G.；Hommer，M.B.；Natan，M.J.，Preparation andCharacterization of Au Colloid Monolayers.Anal.Chem.1995，67，(4)，735-743)；(2)在含有140mM的NaCl和5mM的KCl的20mMpH＝7.5的三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲溶液中，配制4.59μM的核酸适配子溶液；此核酸适配子的序列为5’AGT CCG TGG TAG GGCAGG TTG GGG TGA CT 3’；(3)将13nm的金纳米探针溶液和4.59μM的核酸适配子溶液混合；所述的13nm的金纳米探针溶液：4.59μM的核酸适配子溶液体积比为20∶3；(4)接着，将待测浓度的凝血酶加入至(3)的混合液中，反应5min；所述的凝血酶溶液：13nm的金纳米探针溶液：4.59μM的核酸适配子溶液体积比为3∶20∶3；待测凝血酶的浓度范围从0.83纳摩尔每升到167纳摩尔每升；(5)向(4)中的反应液中，加入0.5M氯化钠溶液；加入氯化钠溶液后，马上测定反应溶液的吸收光谱，或者直接用肉眼观察溶液的颜色变化，完成基于金纳米探针和核酸适配子无标记比色测定凝血酶的方法；所述的0.5M氯化钠溶液：13nm的金纳米探针溶液体积比为1∶2。