[发明专利]一种人工湿地污水处理系统微生物活性检测方法

摘要

本发明提供了一种人工湿地污水处理系统微生物活性检测方法，包括人工湿地微生物取样、培养、萃取、测定和计算的基本步骤，本发明采用碘硝基四氮唑作为电子受体，基于INT的强电子亲和性取消除氧步骤，培养时间为2h，以乙醇为萃取剂常温提取微生物细胞内的INTF。本发明的积极效果体现在：INT的电子亲和力大，与氧竞争电子能力强，并可用于检测人工湿地系统中好氧、厌氧及反硝化脱氮微生物的电子传递体系活性，在常温条件下完成萃取过程，避免了高温产生的萃取不完全、萃取剂蒸发等问题；将微生物干重直接测定法与微生物电子传递活性检测过程相结合，避免了因基质和植物根际生物量不同和取样不均而导致的误差。

主权项

1. 一种人工湿地污水处理系统微生物活性检测方法，其特征在于，依次包括如下步骤：(1)从人工湿地污水处理系统中取出附着微生物的植物根须或基质，超声振荡5～10min，收集脱落的生物膜，用水稀释至浓度为5～6g/L，获得微生物悬浊液；(2)将Tris-HCl缓冲溶液和重量浓度为1.0～3.0mg/mL的碘硝基四氮唑(溶液加入步骤(1)的微生物悬浊液，然后置于35～37℃下，暗处振荡培养1～2h，获得培养物；体积比为：微生物悬浊液∶Tris-HCl缓冲溶液＝1∶1.5～2；微生物悬浊液∶INT＝1∶1～2；(3)向步骤(2)的体系中，加入1mL甲醛溶液，终止酶反应，然后，过滤，收集滤饼；甲醛溶液的体积浓度为35～37％，加入的体积比为：步骤(2)的培养物∶甲醛溶液＝1∶0.2～0.3；(4)向滤饼中加入乙醇，搅拌，在35～37℃下，暗处振荡萃取5～10min，然后过滤，收集萃取液，然后在分光光度计的485nm处，以加入0.1～0.2ml间甲酚的样品为空白对照，测定待测样品的INTF萃取液吸光度；(5)计算结果，采用式(1)计算人工湿地污水处理系统微生物电子传递体系活性：$\mathrm{INT}-\mathrm{ETSA}=\frac{{\mathrm{OD}}_{485}\times V}{K\times t\times W}---\left(1\right)$ 式中，INT-ETSA为微生物电子传递体系活性[mg/(g·h)]；OD485为波长485nm处的上清液吸光度；V为萃取剂体积(mL)；K为标准曲线斜率；t为培养时间(h)；W为微生物样品质量(g)。