[发明专利]用于骨质疏松症的RNA干扰载体及大鼠骨髓间质干细胞

摘要

本发明涉及一种用于骨质疏松症的RNA干扰载体及大鼠骨髓间质干细胞。本发明所述的RNA干扰载体是在基于慢病毒的短链发夹RNA表达的骨架质粒中，引入以过氧化物酶体增殖子激活受体γ即PPARγ为作用靶点的可表达出短链发夹RNA即shRNA的DNA片段，构建为慢病毒表达载体；所构建的RNA干扰载体可表达针对PPARγ的特异性短链发夹RNA，从而下调PPARγ的表达。本发明还提供了用上述的RNA干扰载体转染的大鼠骨髓间质干细胞。本发明不仅提供了制备治疗骨质疏松症药物的新途径，还可为其它干细胞源性的细胞治疗和组织工程化产品的开发提供一个良好的实验平台。

主权项

1、一种用于骨质疏松症的RNA干扰载体，其特征在于：在基于慢病毒的短链发夹RNA表达的骨架质粒中，引入以过氧化物酶体增殖子激活受体γ即PPARγ为作用靶点的可表达出短链发夹RNA即shRNA的DNA片段，构建为慢病毒表达载体(lentiviral expression vector)；该质粒含有U6启动子，该启动子是DNA依赖的RNA聚合酶，通过Xhol和Hpal两个酶切位点在U6启动子后引入可表达出短链发夹RNA的DNA片段，该DNA片段的双链序列分别为SEQ ID No.1和SEQ ID No.2，以便在U6启动子作用下表达短链发夹RNA；并且，在插入DNA片段的下游是CMV(巨细胞病毒)启动子控制的GFP(绿色荧光蛋白)基因，由于短链发夹RNA与GFP共表达，以致可通过检测GFP的表达以方便观察短链发夹RNA表达的情况；所构建的RNA干扰载体可表达针对PPARγ的特异性短链发夹RNA，从而下调PPARγ的表达。