[发明专利]一种免疫纳米磁性葡聚糖微球的制备方法

摘要

一种免疫纳米磁性葡聚糖微球的制备方法，属于生物分离技术领域。工艺步骤为：共沉淀法制备纳米级的磁性氧化铁粒子；配成亚铁离子∶铁离子∶镍离子为1∶(1.0－4.0)∶(0.2－0.8)摩尔比溶液；葡聚糖包裹磁性氧化铁粒子；纳米磁性葡聚糖微球的蛋白的连接。优点在于，实现了粒径窄，重复性好，价格低廉，使免疫纳米葡聚糖磁性微球具有天然活性的。

主权项

1.一种免疫纳米磁性葡聚糖微球的制备方法，工艺步骤为：(1)共沉淀法制备纳米级的磁性氧化铁粒子0.05-0.6mol/L；(2)Fe2+∶Fe3+∶Ni2+为1∶(1.0-4.0)∶(0.2-0.8)摩尔比配成溶液，放入密闭反应瓶中，抽成真空，通入氮气进行保护，温度升温至30-60℃，按上述离子溶液∶氢氧化钠溶液为1∶0.2-1体积比以4-20毫升/分钟速度将滴加氢氧化钠溶液滴加到上述离子溶液1中，在500-3000转/搅拌下反应，氢氧化钠滴加完毕后，温度升高到60-100℃，反应30-120分钟，用去离子水清洗3-6遍，保存在20-50mM磷酸盐缓冲液当中，2-8℃保存；(3)葡聚糖包裹磁性氧化铁粒子a、葡聚糖的活化：0.5-3g/ml葡聚糖的醋酸盐溶液2在100-500转/分钟搅拌下，按葡聚糖醋酸溶液：高碘酸钠溶液以1∶0.08-0.5体积比向葡聚糖溶液中添加高碘酸钠溶液，混合，20-25℃下避光反应30-70分钟，反应结束后在2-8℃去离子水中透析20-24小时；将氧化的葡聚糖保存在去离子水中，2-8℃保存；b、纳米磁性葡聚糖微球：1体积的活化的50％葡聚糖和3-8体积50％未活化的葡聚糖混合配成溶液，按葡聚糖溶液∶氧化铁磷酸盐溶液以体积比1∶1的比例混合，100-500转/分钟搅拌，2-8℃反应24-50小时，按葡聚糖溶液∶氧化铁磷酸盐溶液以体积比1∶0.04-0.25的比例混合，混匀，2-8℃反应60-150分钟；将上述溶液在磷酸盐缓冲液中2-8℃透析20-24小时；保存在磷酸盐缓液中，2-8℃贮存；(4)纳米磁性葡聚糖微球的蛋白的连接a.纳米磁性葡聚糖微球的活化：将纳米葡聚糖磁性微球抽干，配制成0.5g/ml纳米葡聚糖磁性微球的氢氧化钠溶液中溶液，混合，按纳米葡聚糖磁性微球溶液∶环氧氯丙烷以1∶0.08-0.4体积比混合，20-25℃反应6-10小时，丙酮、去离子水润洗3-5次；保存在磷酸盐缓冲液当中，2-8℃保存。b.蛋白质的连接：30-100mg/ml纳米磁性葡聚糖微球与0.5-2mg/ml蛋白质量比40-60∶1连接，20-25℃下反应2-4小时，然后在磁板上进行分离，用磷酸盐缓冲液洗涤3-5次，磷酸盐缓冲液保存，2-8℃贮存。