[发明专利]一种免疫纳米磁性葡聚糖微球的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于生物分离技术领域，特别是提供了一种生物磁性分离简便方法，适用于各种生物学方面的分离。

背景技术

本发明涉及葡聚糖纳米磁性微球的制备方法，磁性微球粒径在50-100nm左右，主要应用在核酸，蛋白质，细胞，免疫学测试方面的应用。

葡聚糖(dextran)，又名右旋糖苷，是具有线状主链的一类多糖，主要又1，6-α—D—吡喃糖苷连接在一起，本身及其在体内的降解产物(CO2、H2O)对人体无毒，作为血液扩容剂在临床上应用已有五十多年的历史，另外。葡聚糖分子在弱酸或弱碱的环境下都能稳定存在(JANES KA，CALVO P，ALONSO MJ，Polusaccharide colloidal particles as delivery systems for macromolecules[J]. Adv Drug  Deliv  Rev，2001，47(1)：83-97.)，结构中含有大量的“OH”，能与某些大分子形成紧密的连接。近二十年间，人们发现葡聚糖和某些大分子偶联在一起后，表现出了一些意想不到的效应。如和某些药物或蛋白质、酶等连接，可以增强药物或蛋白质在体内的生物稳定性，延长半衰期，并降低其免疫原性.葡聚糖是天然多糖类层析介质，早在20世纪中期就已经出现了，它具有理想介质的许多特性：高亲水性、粒径小、含有较多的可活化羟基、不与生物大分子发生非特异性吸附，是迄今为止应用最广泛的一种层析、疏水和离子交换色谱的介质之一。近年来，核酸，细胞，蛋白，免疫学测试与纯化在生物学实际工作中起着一个重要的角色。随着重组DNA技术和细胞融合技术的发展，各种生物活性物质如细胞、酶、抗体和核酸等的大量生产成为可能。这些生物活性物质的附加价值极高，但在原料液中含量比较低。因此，低成本、高效率纯化目的产物及有效除去有害物质，达到一个高纯度的分离产物是这些生物产物分离纯化过程所追求的目标。从样品液中分离、提纯于检测各种核酸DNA、RNA、蛋白质和细胞等是生命科学以及临床医学中一个重要的环节。实际样品液中的分离、纯化在时间上和经费上都占相当大的比重，甚至占到80％以上。目前常用的分离方法有沉淀法，离心法，离子交换法、各种色谱法等，这是有些方法需要比较昂贵的仪器设备，有些方法尽管简单易行操作，但是分离效果差；有些方法操作复杂费时，使它们在应用上受到了极大的限制。现代对样品制备的要求是能够实现自动化、小型化；不使用或尽量少使用有毒试剂；速度快、高效；产物适于后续生物操作，成本低等特点。20世纪80年代开始有学者将磁稳流化床用于生物产物的分离。磁稳流化床是一种集成份分离过程、分离速度床、固定床和磁分离技术的优点集于一身，既可以减少离心或者过滤等单元操作步骤、分离速度快、操作条件温和、过程效率高、产物活性收率高、降低分离纯化的成本，生物分离中具有诱人的开发前景。磁稳流化床的核心是磁性分离介质，因此适用于磁稳流化床的磁性分离介质的合成是磁稳流化床操作实现的关键。

但是到目前为止商品化的产品主要集中在国外产品，虽然性能比较好，但是价格昂贵，让一些研究机构和中小企业望而却步，而且磁性微球粒径主要集中在微米级，粒径大，同时大部分磁性微球的所包被的有机层，有些包被一些糖类的物质但是由于物理吸附或者通过简单的化学键连接而成，易脱落，并且粒经分布宽，不均匀(Steefan Miltenyi.：High Gradient Magnetic Cell Separation With MACS.JCytometry 11：231-238(1990)，这样对于有些分离受到限制，同时在蛋白包被过程中过程中，常常使用使用溴化氰，然而溴化氰有剧毒，还有溴化氰活化后的基质上的配基常常有泄漏现象(Clonis YD，Small DAP.High-performance dye-ligandChromatograph.ln    Reactive    in Protein    and    EnzymeTechnology(M).London：Macmillan Press，1 987.87-100)。

因此本发明的一个目的是制备了一种通过加入一种交联剂使在氧化铁外面包裹一层结实的天然活性物质葡聚糖连接有免疫磁性微球，粒径小，粒径分布窄，具有天然的生物活性，通用性强，价格低廉，偶联剂为无毒的化学偶联剂，活化性机制的配基完善。

发明内容

本发明在于提供一种免疫纳米磁性葡聚糖微球的制备方法，实现了粒径窄，重复性好，价格低廉，使免疫纳米葡聚糖磁性微球具有天然活性。

本发明工艺步骤如下：