[发明专利]一种提高重组人巨噬细胞抑制因子－1(MIC－1)在毕赤酵母中表达量的方法

摘要

本发明涉及了一种提高重组人巨噬细胞抑制因子在毕赤酵母中表达量的方法。本发明其特征在于应用分子生物学方法改造了人巨噬细胞抑制因子基因序列，使其更适合在毕赤酵母中表达，构建了含有巨噬细胞抑制因子的外泌型表达载体，采用PEG1000法转化GS115毕赤酵母菌，用G418抗性浓度递增法筛选多拷贝克隆，得到高表达毕赤酵母工程菌GS115/pPIC9K－MIC－1。巨噬细胞抑制因子毕赤酵母工程菌经甲醇诱导表达，表达产物直接分泌到胞外，离心所得的上清液中即含有重组蛋白表达产物－巨噬细胞抑制因子。它具有提纯工艺简单、成本低、易于大规模表达的优点，为以后的功能研究及抗体制备提供抗原等奠定了基础。

主权项

1.一种提高重组人巨噬细胞抑制因子-1在毕赤酵母中的表达量的方法，其特征在于人巨噬细胞抑制因子-1基因序列如下：GCT AGA AAC GGG GAC CAC TGT CCA CTC GGG CCC GGG CGT TGT TGT CGT CTG CAC ACG GTCAGA GCT TCG CTG GAA GAC CTG GGC TGG GCC GAT TGG GTG CTG TCG CCA CGG GAG GTGCAA GTG ACC ATG TGC ATC GGC GCG TGC CCG AGC CAG TTC CGG GCG GCA AAC ATG CACGCG CAG ATC AAG ACG AGC CTG CAC CGC CTG AAG CCC GAC ACG GTG CCA GCG CCC TGCTGC GTG CCC GCC AGC TAC AAT CCC ATG GTG CTC ATT CAA AAG ACC GAC ACC GGG GTG TCGCTC CAG ACC TAT GAT GAC TTG TTA GCC AAA GAC TGC CAC TGC ATA TGA克隆插入带有甲醇调节型启动子(AOX1)的载体pPIC9K中，获得表达载体pPIC9K-MIC-1，采用PEG1000法转化GS115毕赤酵母菌，用G418抗性浓度递增法筛选多拷贝克隆，得到高表达毕赤酵母工程菌GS115/pPIC9K-MIC-1。