[发明专利]一种检测啤酒大麦和麦芽中总泡沫蛋白质含量的方法

摘要

本发明提供一种检测啤酒大麦和麦芽中总泡沫蛋白质的方法，采用优化的蛋白提取方法，使用较为普及而常用的考马斯亮蓝定量蛋白法(Bradford法)，能够准确直观的检测到啤酒大麦和麦芽中总泡沫蛋白质的变化情况，方法简便快速，适用性强。

主权项

1.一种检测啤酒大麦或麦芽中总泡沫蛋白质含量的方法，其特征在于按以下步骤进行操作：(1)取粉碎后的大麦或麦芽1g，置于离心管中，加入4ml 4℃提取缓冲液，摇匀，置4℃提取1h，其间每10min摇振一次，2800×g离心10min，将上清液收集至另一个试管中，再次向沉淀中加入4℃提取缓冲液3ml，摇匀，置4℃提取1h，2800×g离心10min，取上清液，合并两次所得上清液；(2)将前述所得上清液于沸水浴放置20min，4000×g离心10min，取上清液，即得蛋白溶液A；(3)分别取浓度为0.2mg/ml、0.3mg/ml、0.4mg/ml、0.5mg/ml、0.6mg/ml、0.7mg/ml、0.8mg/ml的牛血清白蛋白溶液0.1ml于具塞试管中，并以0.1ml缓冲液T为空白对照，加入考马斯亮蓝(Bradford)工作液5ml，摇匀，静置5min，在595nm下测定各管的吸光值，每个样品作一组平行，绘制标准曲线；(4)取100ul前述蛋白溶液A于10ml具塞试管中，加入5ml考马斯亮蓝(Bradford)工作液，轻柔摇振，静置5min，在595nm下测定吸光值，由标准曲线计算其蛋白含量；以上所述：提取缓冲液为pH7.5，其中含有50mmol·L-1三(羟甲基)氨基甲烷(Tris)，10mmol·L-1氯化钠，1mmol·L-1二硫苏糖醇，1mmol·L-1乙二胺四乙酸二钠，余量为水；考马斯亮蓝(Bradford)工作液的组成为：考马斯亮蓝(Bradford)贮液30ml，95％乙醇15ml，85％磷酸30ml，用水定容至500ml，过滤不溶颗粒，保存于棕色瓶中；缓冲液T为pH7.5，其中含有50mmol·L-1三(羟甲基)氨基甲烷，10mmol·L-1 氯化钠，余量为水；牛血清白蛋白标准溶液使用缓冲液T配制而成，浓度为1mg/ml；所述考马斯亮蓝(Bradford)贮液，其组成为：95％乙醇100ml，85％磷酸200ml，考马斯亮蓝G250 350mg。