[发明专利]一种分离鉴定血液中有核红细胞的方法

摘要

本发明公开了一种分离鉴定血液中有核红细胞的方法，包括以下步骤：(一)配制试剂；(二)制备防脱胶玻片；(三)选择有核红细胞染色方法；(四)显微操作法获取血液中有核红细胞。本发明分离鉴定血液中有核红细胞的方法能有效识别有核红细胞，40例样本均能检出有核红细胞，检出率100％，每例发现有核红细胞2×10⁶～6×10⁶个/ml。本发明联苯胺染色后有核红细胞易于识别，熟练的显微操作能迅速获取单个有核红细胞，为应用单个有核红细胞进行基因分析打下良好的前期基础。

主权项

1.一种分离鉴定血液中有核红细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤：(一)配制试剂(1)多聚赖氨酸工作液：多聚赖氨酸储备液与双蒸水1∶10充分混合，气泡消失后备用；(2)PH 7.4含0.5％BSA的0.01mol/L PBS：氯化钠 6.5gNa2HPO4·12H2O 4gNaH2PO4·2H2O 0.35g加双蒸水800ml，调节PH值至7.4，双蒸水补至1000ml，0.01mol/L PBS，高压灭菌后，加入5g BSA，40℃保存；(3)含KOH 200mmol/L，DTT 50mmol/L的碱性细胞裂解液：400mmol/L KOH 1ml1mol/L DTT 100ul灭菌注射用水850ul，充分混合，0.22μm微孔过滤器过滤后分装，-20℃保存备用；(二)制备防脱胶玻片(1)载玻片的预处理将普通载玻片用热肥皂水洗刷，自来水清洁干净，烘干，置于硫酸清洁液中浸泡24小时以上，自来水冲洗过夜，双蒸水冲洗3遍，烘干，95％乙醇浸泡24小时，双蒸水冲洗3遍，烤干，15磅高压灭菌20min；(2)多聚赖氨酸包被载玻片将预处理后的玻片在多聚赖氨酸工作液中上下浸蘸10～20秒，分散架于玻片架上，60℃以下烘干，4℃保存备用；(三)选择有核红细胞染色方法；(四)显微操作法获取血液中有核红细胞。