[发明专利]一种生物芯片标记和检测方法

摘要

一种新型生物芯片标记与检测方法。本发明提供了金纳米粒子标记生物芯片和表面增强拉曼检测生物芯片的方法具有一定的通用性，并具有灵敏度高(100ng/mL)，选择性好以及样品消耗量少的特点。应用本方法可实现对多肽，蛋白质检测以及抗原抗体如蛋白A与免疫球蛋白G，酶与底物如激酶PKA与底物的相互作用研究。利用这一方法所获得的多肽检测限为：10fg，线性范围为：3个数量级。这一方法所获得的蛋白A检测限为：100fg，免疫球蛋白(IgG)的检测限为0.1μg/mL；二者的线性范围均为：3个数量级。利用这一方法成功检测到PKA与底物相互作用。

主权项

1.一种生物芯片的标记与检测方法，其特征在于，其步骤和条件为：(1)多肽修饰金纳米粒子的合成，将柠檬酸钠修饰的金纳米粒子与多肽混合溶液以摩尔比1∶50000混合，常温反应1小时后，在转速为13000转/分钟的条件下通过3次离心提纯反应产物，获得多肽修饰的金纳米粒子；所述的多肽混合溶液为胱氨酰丙氨酰亮氨酰天门冬氨酰天门冬氨酸与胱氨酰丙氨酰亮氨酰天门冬氨酰天门冬氨酰甘氨酰赖氨酰-生物素甘氨酸的混合溶液；将多肽修饰的金纳米粒子分散在中性磷酸盐缓冲溶液中，4℃下保存；(2)标记生物芯片，将以美国斯坦福大学布朗实验室所制定的标准方法所制作的生物芯片与200μL的浓度为100ng/mL-100μg/mL的拉曼活性染料标记的亲和素和浓度为5.0×10-9M的多肽修饰的金纳米粒子，在37℃反应1小时，得到标记生物芯片；得到的标记生物芯片清洗并用N2 吹干；所述的生物芯片包括：多肽浓度为1ng/mL-1mg/mL的点阵的多肽芯片，含蛋白A浓度为10ng/mL-1mg/mL的点阵的蛋白质芯片，多肽底物浓度为1ng/mL-1mg/mL的点阵的多肽底物芯片；(3)银增强反应，为了进一步提高检测灵敏度，将标记的生物芯片与1mL银增强试剂反应10分钟；(4)以表面增强拉曼检测上述生物芯片，具体条件和步骤如下：将上述生物芯片放置于Renishaw 2000型激光共聚焦拉曼光谱仪的显微镜样品台上，以氩离子激光器产生的能量为10毫瓦，波长为514纳米的激光为激发波长，使用CCD检测器采集拉曼光谱，每条拉曼光谱的采集时间为10秒。