[发明专利]一种植物根表生防细菌的快速、高效筛选方法

摘要

本发明属于农业生产技术领域，是一种快速筛选植物真菌病害尤其是土传病害生防细菌的方法。改目前的先稀释平板法分离然后多次重复一一对峙培养筛选为病原真菌与植物根表细菌直接对峙培养法筛选，明显提高了生防细菌筛选的效率，并且生防效果增强。本发明的使用材料与传统方法基本相同，价格便宜，方法快捷。广泛应用于多种植物真菌病害生防细菌筛选，适用于从不同植物组织及其器官表面分离筛选生防细菌。本发明将缩短生防细菌的分离和筛选所需时间，加快生防细菌的开发和应用，促进我国生物防治的发展。

主权项

1.一种植物根表生防细菌的快速、高效筛选方法，其特征在于采用改进的TY培养基，稀释平板法分离细菌，在另一Ch+TY平板上均匀地涂上病原真菌悬浮液，然后接种菌落形状、大小和颜色不同的10个细菌菌落进行培养，观察真菌周围是否有抑菌带出现，有抑菌带出现的即为目标细菌；其方法及具体步骤如下：a.细菌分离和初筛用酒精将剪子和镊子表面消毒后，剪3cm左右的不同植物干根，在无菌室将剪下的不同植物干根置于Ch+TY平板上，然后用接种针挑取病原真菌，在植物根平行的位置划线，于25℃真菌培养箱中培养3天左右观察抑菌情况，发现植物根周围有大量细菌，细菌周围出现抑菌带(不长真菌)或菌丝长得较短、产生较少孢子或没有孢子产生，即为目标细菌；b.纯化此时细菌为混合菌，需小心用接菌环挑出细菌，划线纯化，于28℃细菌培养箱中培养，一天后即可观察，如果发现仍有形状、大小和颜色不同的细菌菌落，则需分别挑取进一步纯化，直至每皿呈现形状、大小和颜色均相同菌落；c.复筛方法将已纯化的细菌与病原真菌于Ch+TY平板上划平行线对峙培养，或于Ch+TY平板中心点接入病原真菌，真菌周围约等距离四点接入细菌，于25℃真菌培养箱中培养，2-3天可测定抑菌带宽，计算抑菌率；d.保存将已纯化的细菌接到试管斜面中，蛇形划线28℃培养一天后，储存4℃冰箱中，或将生防菌接入直径为4cm的Ch+TY培养皿中心，28℃培养一天后，储存4℃冰箱中。