[发明专利]Phi BT1－TAT－NLS－HIS6整合酶及其制备方法与应用,其多克隆抗体及其应用

摘要

本发明属生物技术和基因工程技术领域，具体涉及一种用于定点整合的蛋白酶Phi BT1－TAT－NLS－HIS6整合酶及其制备方法，其多克隆抗体及其应用。首先表达纯化Phi BT1－TAT－NLS－HIS6整合酶蛋白质，该蛋白质保持PhiBT1整合酶的基本特性，但是其可以通过蛋白转导进入高等生物细胞，并增加蛋白向细胞核转移的能力，同时适用于细胞外体系以及活细胞体系中介导特异性附加在attP与attB上的DNA分子之间的交换与转移等基因操作。用Phi BT1－TAT－NLS－HIS6整合酶蛋白质直接与佐剂相混合，注射免疫动物，制得Phi BT1整合酶多克隆抗体。该抗体可以用于特异性识别Phi BT1整合酶蛋白质。

主权项

1.一种表达重组Phi BT1-TAT-NLS-HIS6整合酶蛋白的方法，其特征在于具体步骤：使用大肠杆菌表达Phi BT1-TAT-NLS-HIS6整合酶蛋白并用NTA树脂纯化PhiBT1-TAT-NLS-HIS6整合酶蛋白，利用基于PCR引物末端修饰的技术，通过多轮PCR操作在Phi BT1整合酶表达框架3`附加表达编码-TAT-NLS-HIS6的序列，从而形成PhiBT1-TAT-NLS-HIS6整合酶标大框架，将其克隆到原核表达载体pET22b(+)上，经测序鉴定正确后，转化到BL21菌株中，进行大量诱导表达和纯化；条件为：诱导温度15-25℃，时间12-24小时，采用含咪唑的高盐缓冲液梯度洗脱收集纯化蛋白。