[发明专利]虾类抗菌肽基因在益生菌中的重组表达和应用

摘要

本发明的提供了虾类抗菌肽在益生菌中的重组表达及应用，包括虾类抗菌肽基因的克隆，虾类抗菌肽基因的重组载体的构建，抗菌肽基因重组载体的转化与筛选，发酵培养表达抗菌肽的工程菌，表达产物的鉴定、纯化。本发明还提供了重组有上述虾类抗菌肽基因的益生菌的应用，用于水产养殖的饲料，优选为虾用饲料。重组益生菌可以在机体内不断繁殖，在一定时期内持续表达并提供给机体抗菌肽，具有很好的特异性和有效性。

主权项

1、虾类抗菌肽在益生菌中的重组表达，包括虾类抗菌肽基因的克隆，虾类抗菌肽基因的重组载体的构建，抗菌肽基因重组载体的转化与筛选，发酵培养表达抗菌肽的工程菌，表达产物的鉴定、纯化；其中：所述的重组载体的构建是：根据已克隆到的虾类抗菌肽cDNA序列，利用特异引物在其两端加入两个不同的限制性内切酶的酶切位点，PCR扩增抗菌肽基因；将其克隆到益生菌表达载体上，所述的表达载体包括pPIC系列或pLA系列；所述的转化与筛选是将上述构建得到的载体分别转化获得工程菌株，筛选出所需的重组工程菌；所述的表达产物的鉴定、纯化是采用诱导剂诱导工程菌株，破细胞收集上清液，分泌型表达的细胞直接收集上清液，采用超滤、层析等方法纯化抗菌肽，并测定其抗菌谱。