[发明专利]棉花子叶离体培养不定芽诱导植株再生的方法

摘要

本发明涉及棉花子叶离体培养不定芽诱导植株再生的方法，属于植物组织培养范畴。本发明以棉花种子无菌苗的子叶为外植体材料，接种在附加6－苄基氨基嘌呤3.0mg/L、吲哚乙酸1.0mg/L、2－异戊烯腺嘌呤1.0mg/L、硝酸银5.0mg/L的不定芽诱导培养基上，不定芽长到1.5cm高度时转到幼苗生长培养基上，获得再生植株；珂字棉312品种不定芽的诱导频率高达70％左右，陆地棉泗棉3号品种不定芽的诱导频率高达60％左右。棉花子叶离体培养不定芽诱导植株再生技术操作简便，培养周期短，植株再生频率高，为规模化开展棉花体细胞培养和农杆菌介导基因转化提供新的更有效的实用技术。

主权项

1、棉花子叶离体培养不定芽诱导植株再生的方法，其特征在于，1)材料选用棉花种子无菌苗的子叶为外植体材料；2)培养基基本培养基：由MS大量元素、MS微量元素与B5维生素组成，附加葡萄糖30g/L，固化剂phytagel 2g/L；不定芽诱导培养基：在上述基本培养基中添加激素6-苄基氨基嘌呤3.0mg/L，吲哚乙酸1.0mg/L，2-异戊烯腺嘌呤1.0mg/L，硝酸银5.0mg/L；幼苗生长培养基：在上述基本培养基中添加6-苄基氨基嘌呤0.1mg/L；培养基在高压灭菌前用氢氧化钠和盐酸调整pH值至5.8；3)培养方法经硫酸脱绒的棉花种子在70％乙醇中消毒2～3 min，然后用10％双氧水处理30～60 min，表面消毒处理后的种子在25℃室温下无菌水中浸泡24h，剥去种皮后置于1/2 MS培养基上，15h后切取完整的子叶接种在不定芽诱导培养基上；10d后从子叶的基部切口处诱导产生不定芽；不定芽长到1.5cm高度时转到幼苗生长培养基上，获得再生植株；以上培养室温度为25±1℃，在16光照条件下培养。