[发明专利]CRM197突变体的纯化方法

摘要

本发明涉及一种大肠杆菌表达的CRM197突变体的纯化方法，属于医药技术领域。纯化方法步骤包括如下：将包涵体变性、复性后，先利用超滤方法进行浓缩后，在利用阴离子交换层析进行纯化，收集蛋白峰，即可得到高纯度的蛋白样品。本方法具有适合规模化生产、操作简便、生产周期短、产品纯度高、工艺稳定性强等特点。

主权项

1. 一种CRM197突变体的纯化方法，包括如下步骤：(1)采用大肠杆菌以包涵体形式表达重组CRM197突变体，包涵体经过变、复性后得到含有目的蛋白组分的复性液；(2)复性液通过超滤进行分离和浓缩，并用Tris-HCl缓冲液进行换液，将复性液浓缩5-25倍，得超滤浓缩液；(3)上述超滤浓缩液通过阴离子交换层析进行纯化层析，截留核酸和大部分杂蛋白质，得到含有目的蛋白CRM197突变体的分级组分；(4)用平衡缓冲液对阴离子交换层析系统进行平衡，使目的蛋白吸附到阴离子层析柱上，大部分杂质穿出阴离子层析柱；(5)用添加了NaCl的平衡缓冲溶液对上述步骤(4)处理后的阴离子交换层析柱进行洗脱，使目的蛋白穿出阴离子交换层析柱，收集洗脱蛋白液，即得目的蛋白液。