[发明专利]一种冷冻保存神经干细胞的方法

摘要

一种冷冻保存神经干细胞的方法，属于细胞生物技术领域。其特征是直接将细胞包埋固定于一定浓度的胶原培养基中，冻存管中成胶；通过实验确定冷冻保护剂DMSO在胶原－细胞复合物中的最佳导入时间；将15％2×DMSO导入胶原－细胞复合物中，室温平衡15分钟；将冻存管转入控速降温冻存盒中，并将冻存盒放置于－85℃冰箱，确保降温速率为－1℃/min，4小时后转入－196℃液氮保存。本发明的效果和益处是该方法减轻了DMSO渗透过程中对细胞膜两侧造成压差损伤。复苏后细胞－胶原复合物保持良好的完整性，细胞形态和活性好，可直接用于体内移植。

主权项

1.一种冷冻保存神经干细胞的方法，其特征在于如下步聚：1)确定冷冻保护剂DMSO在室温15℃下，加入到胶原-神经球复合物中的平衡时间为15min；2)制备15％2×DMSO的冷冻培养液；3)离心收集“神经球”，计每10ul体积的神经球数；4)制备胶原-神经球的混合液，胶原的终浓度为1.75mg/ml，神经球的密度为1×104个/ml；5)将胶原-神经球的混合液转移到2ml的冻存管中，每管250μl，在37℃，2小时胶原凝固成胶；6)将制备好的冷冻培养液加入到胶原-神经球凝胶中，每管250μl，室温平衡15分钟；7)将冻存管转入控速降温冻存盒中，并将冻存盒放置于-85℃冰箱，确保降温速率为-1℃/min，4小时后转入-196℃液氮保存；8)37℃水浴，快速复温，吸出弃掉胶原-细胞复合物上层的冷冻保护液；加入新鲜培养基500μl，室温平衡5分钟后，吸出弃掉；该步骤重复3次；9)将胶原-细胞复合物从冻存管中转移到培养板中继续培养，准备进一步的生物学特性的检测。