[发明专利]通过融合蛋白的自我蛋白剪切制备重组蛋白有效
| 申请号： | 200680014330.X | 申请日： | 2006-04-25 |
| 公开（公告）号： | CN101198700A | 公开（公告）日： | 2008-06-11 |
| 发明（设计）人： | F·韦特;C·阿赫谬勒;P·威时纳;B·奥尔;S·珀德米尔塞格 | 申请（专利权）人： | 桑多斯股份公司;奥地利勃林格殷格翰有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/62 | 分类号： | C12N15/62;C12N9/50;C12P21/06 |
| 代理公司： | 北京纪凯知识产权代理有限公司 | 代理人： | 戈泊 |
| 地址： | 瑞士*** | 国省代码： | 瑞士;CH |
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| 摘要： | 本发明涉及一种通过重组制备所需的异源多肽的方法，该方法包括下列步骤(i)培养细菌宿主细胞，该宿主细胞通过表达载体得以转化，该表达载体包含一个为融合多肽编码的核酸分子，该融合多肽包含一个瘟病毒Npro自我蛋白酶的衍生物，该衍生物与天然的瘟病毒Npro自我蛋白酶相比，至少有一个半胱氨酸被置换为其他的氨基酸残基，第二个多肽与第一个多肽的C端通过下列方式相连，使得通过第一个多肽的自我蛋白水解活性可将第二个多肽从融合多肽中剪切出来，该第二个多肽为异源多肽，其特征在于，其培养是在可以表达融合多肽及形成相关的细胞质包涵体的环境中进行的，(ii)包涵体从宿主细胞中分离出来，(iii)溶解分离出来的包涵体，(iv)所需的异源多肽从融合多肽上通过自我蛋白水解剪切下来，(v)剪切下来的所需异源多肽的分离。 | ||
| 搜索关键词： | 通过 融合 蛋白 自我 剪切 制备 重组 | ||
【主权项】：
1.一种用于重组制备所需的异源多肽的方法，该方法包括下列步骤，(i)培养细菌宿主细胞，该宿主细胞转化了表达载体，该表达载体包含编码融合多肽的核酸分子，该融合多肽包含瘟病毒Npro自我蛋白酶的衍生物，该衍生物与天然的瘟病毒Npro自我蛋白酶相比，至少有一个半胱氨酸被置换为另外一个氨基酸残基，第二个多肽与第一个多肽的C端通过下列方式相连，使得通过第一个多肽的自我蛋白水解活性可将第二个多肽从融合多肽中剪切出来，该第二个多肽为异源多肽，其中培养发生在引起融合多肽表达及形成相应的细胞质包涵体的条件下，(ii)从宿主细胞中分离包涵体，(iii)溶解分离的包涵体，(iv)诱导所需的异源多肽从融合多肽上通过自我蛋白剪切下来，(v)分离剪切下来的所需异源多肽。
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