[发明专利]一种用于含组氨酸肽段富集与测序的方法和试剂盒

摘要

本发明提供了一种用于含组氨酸肽段的富集与测序的新方法和试剂盒。该方法通过蛋白质的还原烷基化和胰蛋白酶酶切、肽段N端氨基的修饰、组氨酸肽的色谱富集与质谱测序，对酶切肽段混合物中含组氨酸肽段进行蛋白质鉴定。利用本方法，大大降低了肽段混合物的复杂程度，显著提高了含组氨酸肽被质谱检出的机会及其在二级质谱中的裂解效率，使碎片离子的信噪比大大提高，二级质谱图的质量明显改善，可根据二级质谱图实现对含组氨酸肽的从头测序。本发明还提供了用于该方法实施的试剂盒。

主权项

1.一种用于含组氨酸肽段富集与测序的方法，该方法包括：(1)用还原剂打开蛋白质分子中的二硫键，破坏其高级结构；用烷基化试剂封闭巯基，防止其重新形成二硫键；(2)用化学消化或酶消化法对蛋白质进行消化，产生适于质谱分析的肽段；用试剂对酶切肽段的侧链氨基进行保护；(3)对肽段进行化学修饰和处理并进行质谱分析；其特征在于所述步骤(3)的处理方法为：(a)用一种或多种化学试剂，对肽段的N端氨基进行修饰，使其带上酸性基团；(b)对肽段样品进行脱盐；(c)用阳离子交换色谱柱分离富集含组氨酸肽；(d)用质谱使含组氨酸肽裂解产生碎片离子的质谱图，对质谱数据进行解析，鉴定产生含组氨酸肽的蛋白质。