[发明专利]蜘蛛体内消化酶活性的快速检测方法－四维信息法

摘要

本发明公开了一种农药对捕食性天敌体内消化酶活性影响的快速检测方法，即四维信息动态监测法。该方法是一个由网络/频谱/阻抗分析仪、电子计算机和金电极等组成的检测架，在农药的影响下，对捕食性天敌体内消化酶活性进行快速检测。利用本方法实时动态监测拟环纹豹蛛中肠蛋白消化酶对酪蛋白的酶促水解过程及三大类农药对酶活性的影响，结果表明这三大类农药的合适低剂量可显著地增强蛋白消化酶的活性，较高剂量地农药可显著抑制蛋白酶的活性，且水解过程稳态频移值可准确地反映酶活性与农药浓度的关系，证实该法比传统的紫外光光度分析法优势明显，可广泛用于生物酶的活性检测。同时低剂量农药对天敌的保护与利用及害虫防治上有广泛的应用前景。

主权项

1、一种农药对蜘蛛体内消化酶活性影响的快速检测方法。其特征是该检测方法包括如下步骤：①最适低剂量农药的选择首先把各类农药(有机磷类、有机氧类、菊酯类等)配制成系列的低剂量浓度，通过在不施农药时，蜘蛛的控虫力测定试验；对害虫施药，蜘蛛不施药，蜘蛛的控虫力测定试验；对蜘蛛施药、害虫不施药时，蜘蛛的控虫力试验和对蜘蛛和害虫同时施药时，蜘蛛的控虫力测定试验，筛选出增强蜘蛛控虫力的最适低剂量浓度，现已筛选出增强狼蛛类的控虫力的最适的甲胺磷(50％)、杀虫双(18％)和烯丙菊酯(0.03％)的最适低剂量浓度分别为原药：水等于2∶5000、12∶5000和1∶20；②酶液提取在体视显微镜下于冰浴中解剖已经用低剂量农药和高剂量农药处理的蜘蛛，取其中肠和消化腺，用一定体积PH8.0的磷酸缓冲液在冰浴中研磨匀浆，匀浆液在0～4℃下用4000×g离心15min，取上清液测定消化酶的活力，也可解剖未经农药处理的蜘蛛，按上述方法得到离体的酶液，然后在酶的活力检测时，加一定量的最适低剂量浓度的农药，检测农药对酶活力的影响；③酶液的总蛋白含量测定：采用考马斯亮蓝G250法测定，牛血清白蛋白为标准蛋白；④酶液的活性检测设备和材料的准备：本检测方法所需设备是：一台网络/频谱/阻抗分析仪(型号HP4395)和一台与之相连的电子计算在阻抗分析仪的输入端通过管道连至一个玻璃池内，玻璃池内设有反应液，反应液中设有一面镀金另一面镀银的压电石英晶体，玻璃池内的底部设有一个搅拌子，玻璃池外设有温控器，玻璃池外的底部设有磁性搅拌器，把玻璃池放入温控器中，然后将两者放在磁搅拌器上振动；⑤消化酶活性的四维动态检测