[发明专利]在含有水杨酸的植物染病植株体中检测水杨酸衍生物或结合物的方法

摘要

本发明公开了一种在含有水杨酸的植物染病植株体中检测水杨酸衍生物或结合物的方法，其采用高压液相层析法检测，具体为：取染病植株在液氮中磨粉，加乙醇涡旋、超声处理，离心，将上清液移入离心管，真空干燥。加石油醚清洗沉淀，振荡后吸出，再加石油醚重复一次，弃上清，沉淀干燥，－80℃保存。HPLC上样前，样品用甲醇重新悬浮，涡旋，超声处理，膜过滤。样品上预先用pH值为2.6且乙腈平衡的C18柱，荧光检测仪检测流出峰。该方法有利于在植物染病植株中，正确寻找和判定在植物的HR和SAR的信号传导过程中起着关键的作用的分子结构，发现植物自身抗病机理，为相关生物农药的制备和生物抗病性的干扰奠定基础。

主权项

1.一种在含有水杨酸的植物染病植株体中检测水杨酸衍生物或结合物的方法，其特征在于：采用高压液相层析法检测；该高压液相层析法包括如下步骤：1)取0.3克左右的含有水杨酸的植物的染病植株体，在液氮中研磨成粉末状，加入2ml体积百分比浓度为90％的乙醇，其中该乙醇中含有体积比为0.5％的乙酸，涡旋、超声处理30min；1700g离心20min；将上清液移入新的离心管；2)沉淀物中再加入2ml步骤1)中所述的乙醇，重复第一次抽提，取上清液；将1、2步上清液合并，真空干燥；3)加入60-90沸程的5ml石油醚清洗沉淀，轻轻振荡后小心吸出，再加入60-90沸程的5ml石油醚重复一次，弃上清，沉淀真空干燥，-80℃保存；4)HPLC上样前，样品用500ul体积百分比浓度为90％的甲醇重新悬浮，涡旋，超声处理5min，0.22um膜过滤；5)100ul样品上预先用pH值为2.6且溶于25mM磷酸二氢钾的体积百分比浓度为20％的乙腈平衡的流速为1.0ml/min的C18柱，用荧光检测仪在305nm激发，检测425nm的发射光来检测流出峰。